[发明专利]一种栉孔扇贝热休克蛋白基因启动子

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说是一种栉孔扇贝热休克蛋白基因启动子。

背景技术

栉孔扇贝是我国重要的海水养殖种类，在我国北方有广大的养殖面积，具有重要的经济意义。当前，栉孔扇贝的养殖业存在着种质退化、病害频发的难题，严重制约了我国栉孔扇贝养殖业的健康发展(张福绥，杨红生.栉孔扇贝大规模死亡问题的对策及应急措施.海洋科学，1999，2：1-5.)。

转基因是物种种质改良的重要手段，其一般指将人工构建的基因功能元件导入到生物体基因组中，达到改变生物体的性状的目的。当前，转基因技术在经济动植物的性状改良中表现出了巨大的潜在应用价值，如转抗病害基因农作物，转生长因子鲑鱼以及可以在乳腺中分泌药物的转基因动物(生物反应器)等。转基因技术在栉孔扇贝中也有着广阔的应用前景，如将抗病基因导入扇贝中，产生抗病品系，将有可能从根本上解决当前扇贝养殖业中夏季病害频发的顽疾；将生长因子类的基因导入扇贝中，有希望培育出高产、低生长周期的品系，缩小养殖成本，增加养殖效益。

当前，在栉孔扇贝中尚无转基因的应用。除导入及整合方法的限制外，可用基因元件(包括扇贝源启动子和功能基因)的缺乏也是重要的限制因素之一。启动子是人工构建转基因载体的不可或缺的重要组成成份，它决定了所转入的基因的表达情况，如表达时间、部位、强度等等。热休克蛋白HSP70是一种重要的生物活性蛋白，参与了生物体内众多的生理过程。Hsp70基因表达的一个重要特征是呈诱导型表达，在高温或病原刺激下有明显的上调表达；而这种表达特征主要取决于hsp70基因的启动子组成。将hsp70基因的启动子元件应用于转基因研究中，可以通过控制温度的高低方便地改变导入基因的表达时机和表达量，使生物体的性状按照人类的意志进行改变，有重要的应用价值。

发明内容

本发明目的在于提供一种栉孔扇贝热休克蛋白基因启动子。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种栉孔扇贝热休克蛋白基因启动子：栉孔扇贝热休克蛋白基因启动子为下述任一项：

(1)栉孔扇贝热休克蛋白基因启动子为序列表中SEQ ID NO.1碱基序列；

(2)与序列表中SEQ ID NO.1限定的DNA序列具有80％以上同源性的DNA序列；

(3)是序列表中SEQ ID NO.1的片段、遗传变体或缺失体，且能控制下游基因转录的DNA分子。

所述启动子作为启动海洋生物组织特异性地表达目标基因的启动子的用途。

所述启动子与与之进行可操作的有效基因连接，而后插入载体中构成表达载体。所述有效基因如免疫相关基因LGBP、hsp70、lectin、toll等，生长相关基因如myostatin、actin、tubulin、EGF等，其它重要生理基因如vasa、SOX、BMP、NOTCH等；载体为表达载体如pCMVp-NEO-BAN、pEGFP、pEGFT-Actin、pSV2、CMV4等。。

而后以可表达的方式将有效基因与所述的启动子连接，得重组片段；将上述重组片段插入载体中；用该载体转化宿主细胞，培养该细胞表达有效基因。

本发明具有如下优点：

1.本发明获得栉孔扇贝热休克蛋白基因启动子，其采用BAC克隆全测序及启动子预测方法，比传统的染色体步移方法更简单快捷。

2.本发明将栉孔扇贝热休克蛋白基因启动子用于转基因载体构建的优势在于：

(1)热休克蛋白hsp70是一种诱导表达的基因，其基因启动子在热刺激后表现出高表达现象。相比于一些持续性表达的载体，其在表达某些对扇贝有害的基因时就体现出较强的优势，如caspase基因，可以诱导其在特殊时期表达，避免持续表达导致机体伤亡。另外，热休克蛋白参与了扇贝体内多种生理过程，必定为一个高效表达的调控元件；用热休克蛋白基因启动子构建转基因载体，所携带的外源基因表达效率很可能会大大提高。

(2)在扇贝转基因实验中使用扇贝自身启动子，不会带入病毒等其他生物的核酸序列，具有更高的生物安全性，有利于将来转基因扇贝进入市场。

3.本发明使用EGFP基因为报告基因构建转基因载体的优点在于EGFP是加强型绿色荧光蛋白，容易观察和检测，能极大地提高转基因动物的筛选效率，有利于扇贝转基因技术的建立。

附图说明