[发明专利]一种枯草芽孢杆菌PA105及制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及饲料添加剂领域，更具体涉及一种枯草芽孢杆菌PA105，同时还涉及一种枯草芽孢杆菌PA105的制备方法，还涉及一种枯草芽孢杆菌PA105在养殖动物饲料添加剂中的应用。 

背景技术

集约化养殖过程中，动物由于环境条件变化容易产生各种应激，比如断奶、天气突然变化等，从而引起动物免疫力降低。一些致病菌，特别是肠道条件性致病菌，能迅速繁殖，进而引发相应的疾病，比如大肠杆菌、沙门氏菌等。目前，主要是通过在饲料中添加抗生素的方法来控制和减弱应激。抗生素补给后可以抑制仔猪肠道致病菌的生长繁殖、有利于有益菌的生长，从而维持肠道的正常微生物群落结构。然而，抗生素在饲料中的大量使用存在着严重的弊端，比如抗生素引起内源性感染和二重感染、耐药菌株的产生、畜禽免疫力下降和畜产品及环境中残留等，很多国家和地区都已经禁止使用抗生素。益生菌具有安全、无污染以及免疫增强功能等优点，成为抗生素替代品的首选，而芽孢杆菌更是益生菌中使用最广泛的一种微生态制剂。 

精氨酸是目前发现的功能最多的氨基酸，是一种半必需或条件性必须氨基酸，在应激条件下属于必须氨基酸。精氨酸作为多种物质(比如多胺和肌酸)的前体和一氧化氮(NO)合成的底物，在蛋白质合 成、增强免疫机能和抗应激等方面具有十分重要的作用。日粮中补给精氨酸能促进动物生长、增强动物抵抗力和抗应激能力。一些芽孢杆菌菌株能在体外和体内合成精氨酸，从而对促进动物生长、增强机体免疫和动物抗应激能力。 

充分发挥枯草芽孢杆菌的抑菌活性，同时结合精氨酸增强免疫和抗应激的活性，筛选得到抗菌活性强、且精氨酸产量丰富的芽孢杆菌菌株，对养殖业具有重要的现实意义。本专利筛选的菌株枯草芽孢杆菌PA105同时具有抗致病菌活性、增强免疫和抗应激功能，从而提高动物生产性能，维护机体健康。目前，结合枯草芽孢杆菌的抗菌活性和产精氨酸活性，在养殖动物的饮水和饲料中应用枯草芽孢杆菌PA105，尚未有报道。 

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)PA105，该菌株具有显著的抗菌功能，在体外发酵培养过程中能分泌精氨酸，能显著提高动物血清中精氨酸水平，从而增强机体免疫、抗应激和促进动物生长。 

本发明的另一个目的是在于提供了一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)PA105在养殖动物饲料添加剂中的应用，该菌株显著优点为饲料中添加该菌株后能显著提高动物血清中精氨酸和谷氨酸水平，促进动物生长，提高动物机体免疫力和抗应激能力。 

本发明的还有一个目的是在于提供了一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)PA105在制备治疗或预防大肠杆菌和/或沙门氏菌 药物中的应用，所述菌株具有显著的抗菌活性，可显著抑制大肠杆菌、沙门氏菌等致病菌的繁殖。 

为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施： 

一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)PA105的制备方法，其步骤是： 

第一步：所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)PA105在Luria-Bertani(LB)固体培养基上在恒温生化培养箱中进行划线培养，培养温度30-37℃，培养时间18-36h。LB固体培养基成分为：胰蛋白胨10g、酵母浸出物5g、氯化钠10g、琼脂粉15g、蒸馏水1000ml，PH值6.8-7.2。 

第二步：从第一步的LB固体培养基上挑取枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)PA105单个克隆株至装有100毫升Luria-Bertani(LB)液体培养基的500毫升锥形瓶中，在恒温生化摇床中进行培养，培养温度30-37，转速150-225r/min，培养时间18-36h。Luria-Bertani(LB)液体培养基成分为：胰蛋白胨10g、酵母浸出物5g、氯化钠10g、蒸馏水1000ml，PH值6.8-7.2； 

第三步：取第二步实验所得到的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)PA105液体发酵培养液，按照3-5％接种量，接种到10L发酵罐中，发酵条件为：装液量4-7L培养基，发酵温度25-40℃，PH值6.8-7.8，发酵时间18-36h，转速，200-400r/min。 

2、本发明枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)PA105抑菌活性检查方法如下：