[发明专利]三聚氰胺定量检测试剂和方法

说明书

技术领域

本发明属三聚氰胺定量检测领域，特别是涉及利用胶体金免疫层析法和金标定量检测仪结合进行乳品的三聚氰胺定量检测。

背景技术

三聚氰胺(melamine)，分子式为：C3N6H6，俗称密胺、蛋白精，IUPAC命名为“1，3，5-三嗪-2，4，6-三氨基”，分子量为126.12，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，中国国家食品质量监督检测中心在2008年9月13日指出，三聚氰胺属于化工原料，不允许添加到食品中。三聚氰胺具有一定的肾毒性，食用后会导致人体泌尿系统产生结石。其分子中含有大量氮元素，用全氮法检测蛋白质含量时不能够区分这种“伪蛋白氮”，因此一些不法商家往乳制品中添加三聚氰胺粉以提高蛋白质含量，这对广大消费者特别是婴幼儿造成了严重的危害，对我国的乳业产生了较大的负面影响。如何解决“乳品安全”问题，建立原料乳的快速检测技术是关键之一。

目前，用于奶粉、原料奶及牛奶中定量检测三聚氰胺含量的方法主要有HPLC法、HPLC-MS/MS法、GCMS法、ELISA法等，但这些方法耗时费力、成本高、对检测人员的专业性要求高，不适用于现场检测。收奶站常用胶体金法定性检测试纸测量乳品中的三聚氰胺，检测限一般为0.5ppm，并不能确定其含量。本研究即采用胶体金免疫层析法定量技术测定乳品中三聚氰胺的含量，使用金标定量检测仪与三聚氰胺免疫胶体金检测试纸配套检测，通过检测线颜色的强弱来测定三聚氰胺含量。胶体金免疫层析法测定乳制品中三聚氰胺的含量，相对于定性检测而言，三聚氰胺定量检测试剂(胶体金法)能在现场检测时就确定其含量，该方法简便、快速，实用性强，检测结果稳定可靠，成本低，便于记录和溯源。

发明内容

所要解决的技术问题

本发明所要解决的技术问题是提供一种利用胶体金免疫层析法和金标定量检测仪结合进行乳品的三聚氰胺定量检测的试剂及其方法，以克服现有三聚氰胺胶体金定性检测试纸不能定量检测，HPLC等其他方法，检测成本高，不能现场测定、出报告速度慢，影响原料乳的及时加工。

技术方案

本发明的技术方案之一是提供一种一种三聚氰胺定量检测试纸，该试纸在检测区的近样品端提供一个MEL抗体-胶体金区域，在检测区的另一端包被有三聚氰胺抗原检测线，通过该检测线中的三聚氰胺抗原与样品中存在的三聚氰胺竞争性结合所述MEL抗体的结合位点来定量测定样品中的三聚氰胺含量。

上述的三聚氰胺定量检测试纸的另一种优选方案为，所述的检测试纸采用胶体金免疫层析法定量测定样品中的三聚氰胺。

上述的三聚氰胺定量检测试纸的一种优选方案为，在所述检测区内还具有至少一条质控线。

上述的三聚氰胺定量检测试纸的另一种优选方案为，所述的检测试纸对原料奶的检测范围为0.12mg/L-12mg/L，优选为0.25mg/L-4mg/L。

上述的三聚氰胺定量检测试纸的再一种优选方案为，所述的待测牛奶样品无需稀释或预处理。

上述的三聚氰胺定量检测试纸的又一种优选方案为，所述的试纸还包括一样品垫，所述样品垫为经0.1-10％BSA，0.05-3％Triton X-100的0.01-0.1mol/L PBS pH＝5-10处理液浸泡处理的玻璃纤维膜。

一种三聚氰胺定量检测试纸的制备方法，包括如下步骤：将20-200mL0.001-0.1％的HAuCl₄溶液加热至沸，在剧烈搅拌下迅速加入0.5-5mL 1％的柠檬酸钠溶液，保持沸腾状态反应5-30min后关闭热源即得胶体金溶液，调节pH至5-10，混合MEL单克隆抗体与胶体金溶液，涡旋反应10-30分钟，加入10％BSA封闭，重悬并浓缩，得到稳定的金标抗体。

上述的三聚氰胺定量检测试纸的制备方法的一种优选方案为，所述的pH值调节为7-9。

一种三聚氰胺定量检测方法，依次包括如下步骤：

将不同的液体样品进行不同处理后，滴于权利要求1所述的检测试纸的样品垫一侧，通过待测抗原与检测线中的三聚氰胺抗原竞争性结合MEL抗体使胶体金聚集而显色；

利用金标定量检测仪测量读取检测线的光密度来获得被检样品中三聚氰胺的浓度，测定时间为样品滴加后10±2min。

上述的定量检测方法的一种优选方案为，所述试纸需将原料奶稀释处理，检测范围为0.12mg/L-12mg/L。

上述的定量检测方法的另一种优选方案为，所述试纸检测原料奶时用到的样品稀释液为0.01M PBS。