[发明专利]抗人磷酸二酯酶4D相互作用蛋白变体5的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及含有抗体的医药配制品，或单克隆抗体的制备，具体是一种抗人磷酸二酯酶4D相互作用蛋白变体5的单克隆抗体及其应用。 

背景技术

Myomegalin（MMG/MMGL/PDE4DIP, phosphodiesterase 4D interacting protein, 磷酸二酯酶4D相互作用蛋白）是一种崭新的蛋白，它分布于胞浆中，并在高尔基体和中心体处聚集，提示该分子的主要功能涉及这两个细胞器的cAMP信号转导。Myomegalin基因很长，约15万碱基对，但是其每个外显子都很小，大约只有30-40氨基酸，因此Myomegalin的变体很多。目前尚不清楚具体有多少个Myomegalin的变体存在。 

Myomegalin蛋白结构中含有α螺旋和coiled-coil结构，以及微管相关蛋白结合域和亮氨酸拉链模式。Myomegalin还被称作PDE4DIP，这是由于该蛋白可以结合循环中的PDE4D（核苷酸磷酸二酯酶）。在肿瘤性疾病中能够见到Myomegalin的异常表现。骨髓增生异常的病人中可以检测出PDE4DIP-PDGFRB融合基因。在食管肿瘤中可以见到Myomegalin变体5蛋白的高表达。变体1蛋白则在大多数的肿瘤细胞中缺失。由此可见，Myomegalin变体与肿瘤的关系尚未完全阐明，值得进一步研究。 

1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊断、预防、治疗提供了新的工具。单克隆抗体是研究蛋白质表达和分布的主要工具之一，针对Myomegalin的单克隆抗体可以检测细胞和组织，尤其是肿瘤组织中Myomegalin的表达水平和定位情况，有助于深入研究Myomegalin的细胞学功能及在肿瘤中的生物学作用。 

发明内容

本发明是为了解决Myomegalin在细胞生物功能中的作用，以及Myomegalin与肿瘤之间的关系，应用于基础医学研究和临床检测问题，而提供一种抗人磷酸二酯酶4D相互作用蛋白变体5蛋白的单克隆抗体及其应用。 

本发明是按以下技术方案实现的。 

一种抗人磷酸二酯酶4D相互作用蛋白变体5蛋白的单克隆抗体，特点是该抗体特异性识别人磷酸二酯酶4D相互作用蛋白变体5蛋白1103-1116位点氨基酸；该抗体由保藏号为CGMCC No.5078的杂交瘤细胞株产生，氨基酸序列为序列表所示的氨基酸序列。 

一种杂交瘤细胞，该杂交瘤细胞株产生抗人磷酸二酯酶4D相互作用蛋白变体5蛋白单克隆抗体，该杂交瘤细胞株保藏号为:CGMCC No.5078。 

所述抗人磷酸二酯酶4D相互作用蛋白变体5蛋白的单克隆抗体在制备免疫组化检测试剂中的应用，用来检测人体组织及细胞中磷酸二酯酶4D相互作用蛋白变体5的表达与定位。 

以此原核表达多肽免疫BALB/c小鼠，取小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤细胞（SP2/0）细胞融合，用上述原核表达多肽进行筛选，获得阳性克隆，亚型鉴定及小鼠腹腔注射制备腹水，腹水抗体进行细胞和组织的免疫组化，观察Myomegalin变体5蛋白的表达和定位检测。 

这样设计的本发明，其抗体与Myomegalin变体5蛋白具有特异性结合能力，制备人Myomegalin变体5蛋白的免疫组化检测试剂，用来检测人体组织特别是肿瘤组织细胞中Myomegalin变体5的表达与定位。 

杂交瘤细胞株由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏； 

地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。 

保藏号为：CGMCC No.5078，保藏日期：2011年7月22日。 

附图说明

图1是Hela细胞的Myomegalin变体5蛋白免疫荧光染色图； 

图2显示Myomegalin变体5蛋白在乳腺导管内癌中的表达与定位； 

图3显示Myomegalin变体5蛋白在正常乳腺中的表达。 

具体实施方式

下面结合附图及实施例对本发明做详细的说明。 

一、Myomegalin变体5（磷酸二酯酶4D相互作用蛋白变体5）的单克隆抗体的制备 

1.实验材料来源