[发明专利]检测血吸虫病循环抗原的胶体金免疫层析试剂盒及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程领域，尤其涉及一种试剂盒，特别是一种基于IgG2b、IgM两种单抗的检测血吸虫病循环抗原的胶体金免疫层析试剂盒及制备方法。

背景技术

1、免疫诊断在日本血吸虫病防治中的重要性

血吸虫病是一种广泛流行于热带和亚热带地区的人兽共患寄生虫病，全球76个国家和地区的约2亿人口受感染，有6亿人口受感染威胁。我国是日本血吸虫病流行区，建国初期曾严重影响了人们的正常生产和生活。经过50多年的防治，已经取得了举世瞩目的成就，到2003年全国共有血吸虫病病人数843007人，较建国初期(1161.2万人)减少了92.74％。已有广东、上海、福建、广西、浙江等5省(区、市)阻断了血吸虫病的传播；仅剩湖南、湖北、江西、安徽、江苏等5省湖区及川、滇山区未得到控制。我们在欣喜的同时，也面临着进一步防治工作的巨大挑战。随着防治工作的深入，人群感染度不断下降，低度流行区扩大，血吸虫病的病原学诊断在现场大范围的应用越来越困难，不但敏感性差、费时费力，且不易被群众和工作人员接受。另一方面，现在控制血吸虫病的主要手段是吡喹酮化疗，但大规模、反复单一药物化疗，可能产生药物抗性，据国外报道，已经出现具吡喹酮抗性的曼氏血吸虫株，因此研制用于血吸虫病低度流行区的敏感性和特异性更高的诊断手段已经被列为第三大世界血吸虫病防治规划优先研究项目。

2、循环抗原在日本血吸虫病免疫诊断中的作用

经过几十年的发展，血吸虫病免疫诊断技术已具有较高的敏感性、特异性和可行性。检测血吸虫循环抗体是一种成本低、操作简单的检测，也是目前现场流行病学调查时应用最广的途径，但循环抗体在治疗后相当长一段时间内仍保持较高水平，不易区分既往感染和现症感染，无法在现场应用时确定目标化疗人群；而且难以反映药物疗效，不宜用作疗效考核的评价指标。另一种途径是检测循环抗原，循环抗原(circulating antigen，CAg)是存在于患者血液、唾液、尿液等体液中的血吸虫虫体的代谢产物及分泌物，检测患者血清或尿液中的循环抗原，可评估虫负荷数和活动性感染，可以作为诊断的依据。而且，在治疗后，CAg转阴较快，检测循环抗原可以作为疗效考核的依据，基于循环抗原检测的各种方法层出不穷，但都困扰在敏感性低、特异性不强的问题上，因此寻找敏感性高、特异性强的循环抗原检测方法和技术是血吸虫病免疫诊断的新方向。

3.单克隆抗体技术在血吸虫病免疫诊断技术中的应用

自Kohler和Milstein(1975)发明单克隆抗体制备技术以来，单抗技术广泛运用于医学和生物学的各个领域，为疾病的发生、发展、诊断和治疗提供了重要的手段。单克隆抗体是由一个细胞产生的，其成分(类，亚类，型和结合P位等)是同源的，只针对复杂抗原的一个抗原决定簇，并有相同的亲和性，抗体滴度也很高，检测循环抗原具有高度的特异性，抗原和单抗可规模化生产，方法简便实用，且具有较好的疗效考核价值，可区分现症感染与既往感染，可用于血吸虫病的免疫诊断和流行病学现场调查。

发明内容

本发明的目的在于提供检测血吸虫病循环抗原的胶体金免疫层析试剂盒及制备方法，所述的这种检测血吸虫病循环抗原的胶体金免疫层析试剂盒及制备方法要解决现有技术中检测血吸虫循环抗原的方法敏感性低、特异性不强的技术问题。

本发明提供了一种检测血吸虫病循环抗原的胶体金免疫层析试剂盒，包括一个盒体，所述的盒体中设置有一个垫板，所述的垫板的上侧的一端设置有一个样品垫，所述的垫板的上侧的另外一端设置有一个末端吸水垫，所述的垫板的中部设置有一个检测层，所述的检测层和所述的末端吸水垫紧密连接，在所述的样品垫和所述的检测层之间设置有一个金标垫，所述的金标垫上含有胶体金标记的抗血吸虫病循环抗原单克隆抗体，所述的样品垫、金标垫和所述的检测层紧密连接，在所述的检测层上包被有检测线和质控线，所述的盒体的一个正面上设置有一个加样孔和一个观察孔，所述的加样孔位于样品垫的上方，所述的观察孔位于所述的检测线和质控线的上方。

进一步的，所述的检测层的一端设置在所述的金标垫的下侧，所述的金标垫的一端设置在所述的样品垫的下侧。

进一步的，所述的检测层的另外一端设置在所述的末端吸水垫的下侧。

进一步的，所述的检测层为硝酸纤维素膜。

进一步的，所述的检测线是将质量百分比浓度为1～3％的甲醛固定液固定浓度为0.8～1.5mg/ml的抗血吸虫可溶性抗原的单克隆抗体IgG2b后，均匀地喷在检测层中段制成。