[发明专利]液相色谱串联质谱快速测定乳与乳制品中三聚氰胺方法

说明书

技术领域

本发明属于一种液相色谱串联质谱快速测定乳与乳制品中三聚氰胺方法。

背景技术

三聚氰胺作为化工原料可用于塑料、涂料、粘合剂、食品包装材料的生产，资料表明，三聚氰胺可能从环境、食品包装袋等途径进入到食品中，其含量很低。三聚氰胺不是食品原料，也不是食品添加剂，是禁止人为添加到饲料和食品中的，国家标准^[1]中三聚氰胺的限量为1 mg/kg。近年来，人为添加三聚氰胺导致的严重案例时有发生^[2-4]，因此对三聚氰胺的快速有效的检测方法是十分必要的。

目前国际上通常采用凯氏定氮法测定饲料中粗蛋白质的含量，即以含氮量的多少乘以6.25 得出蛋白质含量。三聚氰胺并没有实际作用，更没有任何营养价值。牛奶和奶粉添加三聚氰胺，主要是因为其能冒充蛋白质。每1 kg 牛奶中添加0.1 g 三聚氰胺，就能提高0.4 %的蛋白质含量。食品都要按规定检测蛋白质含量，要是蛋白质含量不够，说明牛奶兑水兑得太多，或者说明奶粉中有太多别的粉，用全氮测定法测蛋白质含量时根本不会区分这种伪蛋白氮。三聚氰胺进入体内后似乎不能被代谢，而是从尿液中原样排出。但是，科学家研究发现动物长期摄入三聚氰胺会造成生殖、泌尿系统的损害，如膀胱、肾部结石，并可进一步诱发膀胱癌。

近年来，宠物饲料中发现三聚氰胺并导致宠物死亡的案例时有发生。2007 年3 月，美国发生宠物食品导致宠物死亡的事件，美国食品药品管理局(FDA) 在随后的调查中发现，宠物食品所用的小麦鼓蛋白添加物中含有较高浓度的三聚氰胺。同时，该物质也可能通过食物链影响人体的健康，前不久我国发生的“三鹿结石奶粉事件”，从三鹿集团的婴幼儿配方奶粉中发现高含量的有毒物质三聚氰胺，到全国阶段性查出22 家婴幼儿配方奶粉生产企业的69 批次产品检出了含量不同的三聚氰胺，令人触目惊心!

目前三聚氰胺在食品中的残留检测分析报道较少，主要有：气质联用（GC-MS）法、超高效液相色谱 - 电喷雾串联质谱法、反相高效液相色谱法、高效液相色谱 - 二极管阵列法、高效液相色谱法( HPLC) 、高效液相色谱 - 四极杆质谱联用、固相萃取与高效液相色谱联用、液相色谱串联质谱法(LC-MS/ MS) 等。

气质^[7-9]法选择性好，但是其前处理过于复杂，并且需要较长的分析时间。无法适应需处理大量样品的场合。

高效液相色谱法^[10-13]相比气质联用法则相对简便，快速，许多研究表明使用反相柱如C₁₈，C₁₈混合柱等可以有效地分析三聚氰胺，但由于柱分离及检测器的局限，易产生假阳性的结果。另外，由于检测器的灵敏度限制，必须对样品使用萃取柱进行富集处理，提高了处理的难度及成本。

液相色谱-质谱联用法^[14-18]，目前主要的研究大都放在液相色谱串联质谱法上，在具备了液相相对简易的提取方法后，通过使用质谱检测提高了选择性和灵敏度。经过了许多研究者的演化，目前最理想的分析条件是样品经萃取柱净化，超高效液相色谱分离，最终采用电喷雾串联四极杆质谱进行检测。结果表明，当样品中三聚氰胺的含量范围为10～5 000 μg/kg时，线性关系良好( r>0.99)。在10～100 μg/kg的添加水平范围内的平均回收率为83%～94%，相对标准偏差为4.12%～6.15%。该方法的检出限为10 μg/kg。并且高效液相色谱-四极杆质谱联用法可以在定量的同时对样品进行定性，因此准确度高，误判的可能性小。

最终，国家标准GB/T 22388—2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》^[1]中包含中三聚氰胺的三种测定方法，即高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱-质谱/质谱法（LC-MS/MS）和气相色谱-质谱联用法（GC-MS）。定量限分别为2 mg/kg、0.01 mg/kg、0.05 mg/kg。

发明内容

本发明的目的是提供一种不经过萃取柱、能够快速测定乳与乳制品中三聚氰胺的液相色谱串联质谱的方法。

本发明的目的是这样实现的，所述的液相色谱串联质谱（以下简称LC-MS/MS）快速测定乳与乳制品中三聚氰胺方法，具体步骤为：

在待测的乳或乳制品中加入内标，用乙腈提取三聚氰胺，使用正向色谱柱，用乙腈与乙酸铵缓冲盐溶液作为流动相反相分离三聚氰胺，再串联质谱MRM定性、定量分析乳或乳制品中三聚氰胺。所述的乙腈提取的提取剂优选体积比是1:9的水：乙腈的混合液。