[发明专利]一种检测前列腺癌的ELISA试剂盒

说明书

技术领域：

本发明涉及一种检测试剂盒，具体而言，涉及一种能快速、有效的检测出前列腺癌的ELISA试剂盒。 

背景技术：

近年来随着人们生活水平的提高，人口结构的老龄化、饮食结构的改变，前列腺癌(prostate cancer，PCa)的发病率和死亡率呈上升趋势，并且发病年龄日趋年轻化。流行病学数据显示，中国前列腺癌发病率从1993年的1.71人/10万男性人口增加到2005年的7.9人/10万男性人口，而且在以每年10％的速度攀升，成为威胁男性健康的主要因素[ALVAREZA，LOKESHWAR V B.Bladder cancer biomarkers：current developments and future implementation.Curr Opin Urol，2007，17(5)：341-346.]。由于PCa发病机理复杂、易恶化转移，大多数诊断时已是进展期或晚期，最终转变为雄激素非依赖型PCa，临床缺少有效的治疗方法。因此，进行PCa的筛查，早期诊断和治疗，成为提升男性生殖健康的关键点。 

临床早期诊断方法主要是通过前列腺特异性抗原(prostate specific antigen，PSA)筛查，截至目前PSA是最为成熟和广泛的血清肿瘤标志物，然而近年来发现PSA存在着明显缺陷：在前列腺增生、前列腺炎、尿路感染、导尿、前列腺按摩以及膀胱镜检均可导致PSA升高，有较大的重叠，且检测受多因素影响。当PSA水平位于4～10ng/ml时，鉴别良性前列腺增生和前列腺癌困难。由此可见PSA仅对前列腺组织有特异性，但对前列腺癌特异性极低，其升高仅能提示前列腺癌的可能性。在美国经直肠超声引导穿刺活检证实约1/3PSA筛查结果为假阳性。更有研究表明PSA与前列腺癌的关联性已经大大下降[Na YQ，Li M.Attach importance to the research of criterion of treatment in prostate cancer.Nat Med J  China，2005，85：3169.Stamey TA，Caldwell M，McNeal JE，et al.The prostate specific antigen era in the United States is over for prostate cancer：what happened in the last 20years？J Urol，2004，172：1297-1301.]。 

鉴于上述现状，人们着力寻找更有效的新的肿瘤标记物的探索工作始终未曾停止，相关蛋白、基因、酶等在前列腺癌组织中的表达逐渐被人们重视。为此，不断有学者提出各种肿瘤标志物，试图寻找敏感性、特异性更高的生物标志物。 

本发明依据实验研究，筛选出了同时多个指标进行前列腺癌的检测，从而大大提高了前列腺癌的诊断率。 

发明内容：

本发明提供了一种检测前列腺癌的ELISA试剂盒，包括：抗人AnnexinA2抗体、抗人GRP78抗体、辣根过氧化物酶底物缓冲液、蛋白标准品AnnexinA2与GRP78。 

本发明所述的抗人AnnexinA2抗体和抗人GRP78抗体为辣根过氧化物酶标记的抗体。 

本发明所述的辣根过氧化物酶底物缓冲液为TMB、H₂O₂和磷酸柠檬酸底物缓冲液的所组成溶液。 

本发明的ELISA试剂盒可以应用于前列腺癌的临床检测。 

本发明所要解决的问题是，提供一种特异性的快速检测前列腺癌的试剂盒，以及对应的方法和应用。 

本发明采用双向电泳方法比较了前列腺增生细胞BPH-1、雄激素依赖性前列腺癌细胞LNCaP及雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3三种细胞蛋白的组成。并通过质谱分析和数据库检索锁定了2个差异蛋白Annexin A2(SEQ ID NO：1)和GRP78(SEQ ID NO：2)。 

本发明通过Western Blotting方法检测了BPH-1、LNCaP和PC-3细胞中GRP78和Annexin A2蛋白的表达，结果显示GRP78在PC-3中缺失表达，Annexin A2在PC-3特异性表达。 

本发明还公开了所述试剂盒的组装方法与使用方法。 

附图说明：

图1正常良性前列腺增生细胞系BPH-1的双向电泳图固相胶条等点聚焦及12％SDS-PAGE分离显示的蛋白成分。