[发明专利]基于金纳米片的肌钙蛋白I自身抗体检测方法

说明书

技术领域

本发明属于纳米生物技术应用领域，涉及基于金纳米片的肌钙蛋白I自身抗体检测方法。

背景技术

金纳米颗粒具有基于表面等离子共振的光学特性(surface plasmon resonance，SPR)，该性质源于特定波长的入射光与金纳米颗粒表面的自由电子的共振耦合作用。当金纳米颗粒聚集态发生改变或者表面被不同化学分子或生物分子吸附时，其SPR峰将会发生移动或峰形发生改变，这一特性可以用于分析检测方面，并且利用通常的紫外-可见光(UV-vis)光谱仪即可进行。近年来理论和实验研究显示，不对称形状的金纳米颗粒的SPR峰较之球形金纳米颗粒有更高的灵敏性。然而，将不对称形状的金纳米颗粒作为生物检测平台以获得更高的检测灵敏度的研究仍面临着众多的挑战，其中的关键问题就是能否获得胶体级、高单分散以及光学性质稳定的不对称形状的金纳米颗粒溶液。虽然具有纳米厚度和微米长度的金的片状结构也统称为金纳米片，但由于它们整体的大尺寸使得其光学特性远不如三维尺寸均处于纳米尺度(胶体级)的金纳米片显著。然而，现有报道的大部分金纳米片的尺寸仍处于亚微米到几十个微米之间。这些微米尺寸的结构在溶液中极易因重力作用沉淀，限制了基于液相检测方面的应用。少数涉及小尺寸金纳米片的工作常有一些其它形状的副产物伴生并难以高效地纯化。最近，Ha等人首次报道了利用与前述合成金纳米棒相似的CTAB辅助下的“晶种”生长法制备胶体级金纳米片的工作。然而，最终的反应液中仍包含了大量的(约占总数的55％)球形金纳米颗粒。

心肌肌钙蛋白I(cTnl)是心脏特异性蛋白质，参与调控心肌的舒缩，与心脏功能紧密相关。心肌细胞损伤后cTnl释放入血，进入循环的cTnl可激活机体免疫系统产生相应的cTnl自身抗体，并长期存在于循环中。有文献报道，在心肌梗死患者血清中可检测到cTnl自身抗体；Haim S等对原发性扩张型心肌病患者和缺血性心脏病患者血清进行研究，发现部分样本血清抗心肌肌钙蛋白I自身抗体滴度水平增高；等对扩张型心肌病患者进行免疫吸附治疗，发现这些患者的血流动力学得到明显改善；在动物实验中，cTnl抗体可慢性激活心肌细胞膜L型钙通道，细胞内钙离子浓度增高，提示cTnl抗体可能具有心肌损伤作用。但冠状动脉硬化性心脏病患者血清中cTnl自身抗体是否具有心肌损伤的病理作用、是否与患者预后相关，有待进一步研究。

有多篇文献报道，临床检测cTnl的标本中存在cTnl自身抗体高达10％以上，对cTnl的检测结果产生严重负性干扰，应在临床检验cTnl上重视cTnl自身抗体的影响。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于金纳米片的肌钙蛋白I自身抗体检测方法。

本发明的另一目的是提供上述金纳米片的制备和纯化方法。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种基于金纳米片的心肌肌钙蛋白I自身抗体检测方法，在金纳米片上包被心肌肌钙蛋白I抗原，利用金纳米片上包被的心肌肌钙蛋白I抗原与待测样品中心肌肌钙蛋白I自身抗体的特异性结合，通过光谱仪检测金纳米片，实现心肌肌钙蛋白I自身抗体的检测。

所述的纳米金片优选三维棱柱状结构体，底面为边长为50～300nm的三角形，上下底边平行，厚度为2～20nm。

所述的金纳米片通过如下方法制备并纯化得到：

(1)在三甲基十六烷基溴化铵和碘离子的辅助下，通过“晶种”生长法制备纳米金片与球形金纳米颗粒的混合液；

(2)将混合液于30℃静置22～26h，纳米金片与球形金纳米颗粒的混合液发生相分离，金纳米片沉积在容器底部，倒出上清液即可得到纯化的金纳米片。

所述的心肌肌钙蛋白I抗原为纯化的牛心肌肌钙蛋白I。

所述的光谱仪为UV-vis光谱仪。

一种制备并纯化金纳米片的方法，包括如下步骤：

(1)在三甲基十六烷基溴化铵和碘离子的辅助下，通过“晶种”生长法制备纳米金片与球形金纳米颗粒的混合液；

(2)将混合液于30℃静置22～26h，纳米金片与球形金纳米颗粒的混合液发生相分离，金纳米片沉积在容器底部，倒出上清液即可得到纯化的金纳米片。