[发明专利]用于检测丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片

说明书

技术领域

本发明属于体外临床诊断试剂技术领域，具体的涉及一种用于检测丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片，可用于检测血浆、血清中的转氨酶。

背景技术

丙氨酸氨基转移酶（Alanine aminotransferase, ALT）又称为谷丙转氨酶，主要存在于肝细胞血浆内，细胞内浓度高于血清浓度1000-3000倍，只要有1%肝组织发生破坏，就可以使血清中浓度升高一倍，被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。检测血液中的丙氨酸氨基转氨酶对急性乙型肝炎、慢性肝炎、HBV携带者、重型肝炎以及肝硬化、肝癌等一系列病毒性肝炎的诊断和分析有重要意义。 

目前丙氨酸氨基转移酶普遍采用各种生化分析仪器检测，这些仪器都需要使用各种液体试剂，这对某些使用场合带来不便。一是液体试剂保持时间不能过长已经大量试剂可能造成浪费；二是液体试剂不便于运输。

临床急诊生化指标所使用的干化学产品基本上是国外公司的产品，大概有三种类型的产品。第一类是以强生公司为代表的多层膜干片的干化学技术，利用感光胶片的涂层技术将扩散层、反射层、试剂层等试剂涂在透明支撑层上，从支撑层的反面测定光密度的变化。第二类是日本京都公司的干化学技术，其组成为一塑料支撑层，一端为反应区包括样品层和试剂层，试剂层为某种织物作为试剂载体。加样和测试同时在上部进行。第三类为罗氏公司的干化学产品，将试剂层涂在多丝的纤维或者织物上，全血通过玻璃纤维横向过滤后与上试剂层接触反应，通过上部覆盖一透明的支撑层上涂有试剂层和反射层，最上部覆盖一层合成纤维网布作为加样层。以强生公司为代表的多层膜干片生产工艺复杂，对材料设备要求高；以日本京都公司为代表的干片有某些缺陷，如在加样端容易产生一定的气泡、过量液体等，加样和测定在同一测样品可能造成干扰。

国内有公司申请了干化学专利，上海科华生物工程公司申请的专利200720072185.2和200710044719.5，无锡申瑞生物制品有限公司的专利200610161430.7，其中描述了丙氨酸氨基转移酶的测定的干化学试纸条，在这些专利中应用的方法是将配好的检测液直接浸泡在滤纸或者纤维膜上，然后粘合在塑料基材上进行测试，这种方法是将滤纸或者纤维素膜在检测试剂中浸泡，吸附于滤纸或者纤维素膜中的试剂的量无法确定，重复性不能充分保证，缺乏准确性和精密性；此外，该法采用色原显色在610nm-650nm检测，而检测丙氨酸氨基转移酶的国际标准采用速率法，在340nm处监测NADH的氧化速率，反应原理如下所示。

采用干化学试剂片法丙氨酸氨基转移酶的快速检测对疾病的筛查具有重要意义。

发明内容

为克服现有技术中的不足，本发明的目的在于提供一种能够提高检测的准确性和精密度，同时还能提高干片的保存时间的用于检测丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片。

为了解决上述技术问题，实现上述目的，本发明通过如下技术方案实现：

用于测定丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片，包括一下支撑层，所述下支撑层的一端开设有测试孔，其还包一多层膜，所述多层膜包括依次由下往上迭合的透光层、试剂层、辅助层和扩散层，所述多层膜的透光层的一面粘合固定于所述下支撑层的测试孔处。

进一步的，所述扩散层之上设置一上支撑层，所述上支撑层上开设有一加样孔，所述加样孔位于所述上支撑层与所述扩散层结合的位置。

进一步的，所述上支撑层与所述下支撑层之间的孔隙处设置有一中间支撑层。

进一步的，所述透光层为在330nm-380nm透光率在80%以上的透明塑料，厚度为20-300μm。所述透光层可以由各种透明塑料（如聚乙烯ＰＥ、聚丙烯ＰＰ、聚对苯二甲酸乙二醇酯ＰＥＴ、聚碳酸酯PC等）、玻璃等制备而成，尤其以PET为最佳。透光层的厚度以100-200μm为最佳。在340nm-365nm范围透光率80%以上，95%以上为最佳。光源从测试孔入射，并透过透光层，优选的，采用340nm检测，要求所选透光层对340nm波长的光透过率达80%以上。

进一步的，所述试剂层内包含水溶性高分子材料及缓冲液、乳酸脱氢酶和NADH。丙氨酸氨基转移酶分子量较大，不容易透过扩散层进入试剂层，因此，将丙氨酸氨基转移酶的底物置于扩散层，使其能够充分接触，并发生催化反应，产物顺利进入试剂层，进行后续的反应。