[发明专利]一种高含量EGCG的精制提纯方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高含量EGCG的精制提纯方法,属于天然产物化学技术领域。

背景技术

EGCG,即表没食子儿茶素没食子酸酯，结构式见图-1，是从绿茶中提取精制而得。绿茶茶多酚的主要成分是儿茶素。其中又包括表儿茶素（EC）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）等，而EGCG约占儿茶素总量的50％。研究表明EGCG具有较强的抗氧化性和预防癌症及心血管疾病的功能，并可以提高癌细胞对化疗的敏感性，同时降低化疗对心脏的毒性。据文献资料显示，EGCG在治疗癌症，修复DNA、抗肿瘤等方面有较强的药理作用，能够增强免疫系统的功能，抑制肝脂和胆固醇的增长，抑制肿瘤的生长，对痢疾伤害、金黄色葡萄球菌也有极强的抑制作用。目前EGCG主要应用于食品添加剂、保健品等产品。

图-1

由于从绿茶中提取出来的多酚类物质其化学结构与性质都极其相似，都具有强极性，一般的分离方法都很难将其分开。

目前从茶多酚中直接提取表没食子儿茶素没食子酸酯单体的方法主要有柱层析法、高速逆流分配色谱法、离子反应法，乙酰化法等。现有专利报道的柱层析法如CN1465572、CN1470510A都是先经过繁琐的前处理方法去除大部分杂质，再上葡聚糖SephadexLH-20柱提纯；CN101386614A、CN101723927A等经过多次使用不同吸附剂进行层析以达到提纯目的。专利CN1367171A是通过多次逆流萃取后，通过调整PH值后加二价（三价）金属盐进行离子反应，得到沉淀物经过洗涤、酸溶，萃取、脱酸、浓缩、重结晶等一系列步骤最终得到EGCG含量达 90%。专利CN1733753是通过用惰性气体饱和的去离子水溶解茶多酚样品、膜滤、上柱等达到精制提纯的。专利CN10182319A利用茶多酚上的酚羟基乙酰化后过硅胶柱，再脱乙酰化的,乙酰化反应需要在冰浴上进行，反应完成还需大量冰水，且反应时间长，此法只适用于实验室制备。由于反应条件特殊，操作繁琐，耗时长等缺点，无法在大生产上推广使用。专利CN1277068A介绍了一种高纯度单体儿茶素的高速逆流分配色法，目前逆流色谱技术一次分离样品的量小，分离周期长，难以应用于工业生产。专利CN1724530A公开了一种连续中压柱层析制备高纯度EGCG的方法，此法只适合对EGCG含量大于50%的茶多酚进行提纯，收率达到70%左右。

综上所述，以上提纯方法虽可以达到EGCG高含量的要求，但其尚存在许多问题。为解决这些问题，本发明开发出了一种操作简单，节能，收率高的提纯方法。

发明内容

本发明将提供一种从茶多酚中提取高含量EGCG的精制方法。以低含量的茶多酚为原料，经溶解、上柱、洗脱、浓缩、精制，干燥而得。该方法所制得的EGCG为白色粉末，HPLC检测，含量≥98％。

本发明所述的以低含量茶多酚为原料，是指茶多酚EGCG含量在40～50％的绿茶提取物。

本发明所述的从茶多酚中提取高含量EGCG的精制方法，包括以下主要操作步骤：

a. 按1:3～1:8（m/m）的茶多酚与硅胶的重量比对茶多酚进行硅胶柱层析。

b. 按4:6:1～5:5:1比例的乙酸乙酯－石油醚－乙酸混合溶剂进行洗脱，分别收集各洗脱液。

c. 以薄层层析确定b步骤中收集的EGCG洗脱液,并将其高纯度洗脱液合并浓缩，得EGCG浸膏。

d. 按1:6～10（m/v）比例向该固体中加入60～90％乙醇，50℃～70℃水浴中加入搅拌2～3小时，放置过夜结晶，过滤，收集晶体，80℃减压干燥，得高含量EGCG。

其中步骤a、b所述的柱层析条件为：硅胶规格为60～100目。

   本发明所提供的高含量EGCG的精制方法，所得产品含量≥98％，收率≥80％。

具体实施方式:

以下实施例用于进一步说明本发明，但是所述实施例并不代表是本发明的唯一途径，也不意味着对本发明作任何限制。