[发明专利]酶解法分离提取马尾藻多糖的生产工艺

说明书

技术领域

本发明涉及马尾藻多糖的分离提取，尤其是一种酶解法分离提取马尾藻多糖的生产工艺。

背景技术

马尾藻多糖(Sargassum Polysaccharide)作为鸡的疫苗免疫增强剂，可显著提高疫苗的保护率和抗病力，应用前景广阔。据统计，目前国内每年鸡的存栏数为40亿只，若有1.0％的使用率，即每年应用鸡4000万只，以平均每只用量5克计，则年需求量达200吨。按市场价格每公斤200元计，则年销售额达4000万元，纯利润可达为1200万元(利润率按30％计)。然而，目前分离提取马尾藻多糖的水提醇沉法、碱提法存在多糖得率低和总糖含量低的问题，以致于生产效率低、供应不足，难以满足巨大的市场需求。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种多糖得率高和总糖含量高的酶解法分离提取马尾藻多糖的生产工艺。

为解决上述技术问题采用如下技术方案：酶解法分离提取马尾藻多糖的生产工艺，该工艺包括如下步骤：<1>准确称取马尾藻粉，，按料液比1∶15～1∶35加入蒸馏水，加入木瓜蛋白酶使其质量体积浓度为0.5％～1％，先40℃水浴溶解1h，再100℃水浴灭酶0.5h，然后80℃水浴浸提；<2>步骤<1>中浸提后，离心取上清液备用，沉淀按料液比1∶20～1∶35加入蒸馏水，继续浸提，依法浸提1～3次；<3>合并步骤<2>各次上清液，将其浓缩至原体积的1/4，浓缩液加入95％的乙醇至最后醇沉浓度为65～85％，醇沉过夜，弃上清液，离心得沉淀；<4>取步骤<3>所得沉淀，加入马尾藻粉重量10倍的蒸馏水，100℃水浴溶解，溶液离心取上清液，往上清液中加入95％的乙醇至最后醇沉浓度为65～85％，醇沉过夜，弃上清液，离心得沉淀；<5>将步骤<4>所得沉淀冷冻干燥，即得多糖样品。

多糖样品经研磨得粉状多糖样品。

离心3000r/min进行10min。

本发明的酶解法分离提取马尾藻多糖的生产工艺的多糖得率和总糖含量明显高于目前的水提醇沉法和碱提法，应用于生产马尾藻多糖可提高效率、满足市场需求。

具体实施方式

酶解法分离提取马尾藻多糖的生产工艺的研究

一、二次析因设计

1.二次析因设计方案

选定出对实验结果影响最大的6个主要因素为料液比、酶量、浸提温度、浸提时间、浸提次数、醇沉浓度，对这6个主要因素，预留空白进行正交试验析因分析。使用SAS软件，选用N＝12的PB(Plackett-Burman)设计，路径为SAS→解决方案→分析→实验设计→文件→创建新的设计→2级水平。每个影响因素全部选取2个水平进行分析，低水平为-1，高水平为1，实验设计如表1。

表1  PB设计及结果(N＝12)

表1中：OBS是方案；X1是料液比；X2是酶量；X3是浸提温度；X4是浸提时间；X5是浸提次数；X6是醇沉浓度；SO42-％是硫酸根含量。

根据SAS设计出的N＝12的PB设计，按各个因素不同水平进行试验。实验过程：准确称取马尾藻粉10g，按不同水平的料液比加入蒸馏水，按不同水平的酶量称取加入木瓜蛋白酶，40℃水浴溶解1h，100℃水浴灭酶0.5h，放置于不同水平温度进行水浴浸提。浸提后，3000r/min离心10min取上清液，沉淀按该实验组的料液比加入蒸馏水，继续浸提。根据各个实验组的浸提时间以及浸提次数，将各次离心后的上清液合并，所得上清液浓缩至1/4体积，浓缩液按各实验组的醇沉浓度加入95％的乙醇，醇沉过夜，弃上清液，3000r/min离心10min得沉淀，加入100ml蒸馏水，100℃水浴溶解，溶液3000r/min离心10min取上清液，所取上清液继续按各实验组的醇沉浓度加入95％的乙醇，醇沉过夜，弃上清液，3000r/min离心10min得沉淀，各实验组设置一个水平对照实验。所得沉淀经冷冻干燥机冷冻干燥，称量沉淀所得样品重量，将沉淀研磨之后得粉状多糖样品。

2.二次析因设计结果与分析

样品含量测定的结果如表1所示，分析硫酸根(SO4^2-)含量、多糖含量以及总值含量(总值＝(硫酸根含量+多糖含量)x得率)，利用SAS软件对N＝12的PB设计的结果进行分析，路径为SAS→解决方案→分析→实验设计→N＝12的试验设计→Report→GenerateReport得出最后分析结果报告，分析结果如表2、表3、表4。