[发明专利]太平洋鳕鱼精子保存冷冻剂及太平洋鳕鱼精子保存方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种太平洋鳕鱼精子保存的冷冻剂，以及利用这种冷冻剂来保存太平洋鳕鱼精子的方法。

背景技术

在人工养殖鱼类的过程中，往往会遇到雌雄亲鱼性成熟不同步、雄性亲鱼少、精液量不足等问题，影响了鱼类养殖的效率和产量。而鱼类精液保存技术则能够解决这个问题。现有的鱼类精液保存方法主要有常温，低温（0至4摄氏度）两种。其中常温保存具有方便、简单等特点，但是保存的时间非常短，无法解决雌雄亲鱼性成熟不同步的问题。而低温的保存时间虽然较常温保存的时间要长，但在低温保存的过程中，渗透压、pH值等诸多理化因子都会影响最后的保存效果，同时这种方法也无法进行长期保存。因此现在需要一种能够解决上述问题的新型鱼类精子保存冷冻剂以及保存方法。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述不足，提出一种能够长期保存太平洋鳕鱼精子，并能保证解冻后精子活力仍能够达到80%以上的太平洋鳕鱼精子保存冷冻剂，以及利用这种冷冻剂来保存太平洋鳕鱼镜子的方法。

本发明的技术解决方案是：一种太平洋鳕鱼精子保存冷冻剂，其特征在于：所述的冷冻剂由冷冻稀释液和抗冻剂按照9:1（体积比）的比例混合而成，其中冷冻稀释液的组分含量为：

NaCl：    42-48mM，

KHCO₃： 2.5-3.5mM，

CaCl₂：   2.5-3.5mM，

葡萄糖：  35-45mM，

Tris：      1.5-2.5mM，

谷胱甘肽：1.5-2.5mM，

牛血清蛋白：1.5-2.5g/L，

所述的冷冻稀释液的pH值范围是：6.7-6.9；

所述的冷冻剂中的抗冻剂为二甲亚砜（DMSO）。

将冷冻剂与太平洋鳕鱼精液按照1:2（体积比）的比例均匀混合，在3至5℃的环境下平衡25至35分钟，在零下25至零下15℃的环境下平衡8至12分钟，在负零下30至零下110℃的环境下平衡4至6分钟，最后放入液氮中冷冻保存。

本发明同现有技术相比，具有如下优点：

本种鳕鱼精子保存冷冻剂，以及利用这种冷冻剂对鳕鱼精子的保存方法，能够将鳕鱼精子在超低温环境下（零下196摄氏度）进行长期保存，不仅保存时间长，能够解决雌雄亲鱼性成熟不同步的问题，而且还能够保证解冻后的鳕鱼精子活力较好（活力达到80以上），并且这种冷冻剂便于配置，保存方法简便、容易，十分适合于在鳕鱼养殖生产过程中推广应用，其市场前景和科研前景较为广阔。

具体实施方式

下面是本发明的具体实施方式。

一种太平洋鳕鱼精子保存冷冻剂，其特征在于：所述的冷冻剂由冷冻稀释液和抗冻剂两部分组成，其中冷冻稀释液的组分含量为：

NaCl：42-48mM，以45mM为最佳值；KHCO₃：2.5-3.5mM，以3mM为最佳值；CaCl₂：2.5-3.5mM，以3mM为最佳值；葡萄糖：35-45mM，以40mM为最佳值；Tris：1.5-2.5mM，以2mM为最佳值；谷胱甘肽：1.5-2.5mM，以2mM为最佳值；牛血清蛋白：1.5-2.5g/L，以2g/L为最佳值；

      将上述的原料充分均匀混合后，利用0.1M的HCl调节混合物的pH值，将其PH值调整至6.7-6.9，以6.8为最佳（经过上述处理后的冷冻稀释液的渗透压为150-155mosM/kg）。

冷冻稀释液配置完成，放置在4℃的环境下保存。

当需要对太平洋鳕鱼的精子进行长期保存时，取配置好的冷冻稀释液，将其与抗冻剂二甲亚砜（DMSO）按照9:1（体积比）的比例进行混合，制备成冷冻剂，并将太平洋鳕鱼的精液与冷冻剂按照1:2（体积比）的比例进行混合；并将混合剂放入冻存管中；

混合均匀后，在4℃的环境下平衡30分钟；

然后在零下20℃的环境下平衡10分钟；

然后在零下110℃的环境下平衡5分钟，最后直接将冻存管放入液氮中（负196℃）进行冷冻保存。

当需要对超低温保存的太平洋鳕鱼精液解冻时，首先将盛有精液的冻存管从液氮中取出，在零下50℃的环境下平衡3-5分钟，然后将冻存管在37℃的条件下进行水浴，实现快速解冻；解冻后用砂滤海水（pH8.0，盐度31）对鳕鱼精子进行激活即可。

利用这种冷冻剂和保存方法超低温保存的鳕鱼精子，在激活后其精子活力可达到80%以上。