[发明专利]一种从疾病动物模型外周血中快速提取循环的非血缘性有核细胞的组合物和试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于从疾病动物模型的哺乳类动物血液中快速获取循环的非血缘性有核稀有细胞的组合物，由下述成份组成：缓冲液，包被了抗血缘性有核细胞表面标识物抗体的磁性或非磁性免疫微球或免疫颗粒，以及细胞分离介质，其中，所述缓冲液的渗透压介于260～320mOsm/kg H₂O、pH为6.8～7.8，所述细胞分离介质在20℃下的比重为1.072～1.076克/毫升，所述细胞分离介质包含选自下列试剂中的任意一种或任意两种以上的成份：聚乙烯吡咯烷酮包被的胶质二氧化硅，多聚糖和泛影酸钠或其衍生物，一种含糖的溶液，由蔗糖和表氯醇聚合而成的非离子聚合物。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述免疫微球或免疫颗粒的比重高于所述细胞分离介质的比重，所述免疫微球或免疫颗粒共价或非共价结合有特异性地识别下述哺乳类动物的白细胞表面标示物的一种或多种的多克隆或单克隆抗体：CD3、CD31、CD34、CD45、CD69、CD84、或CD102。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中，所述循环的非血缘性有核稀有细胞选自：循环的具有上皮来源的任何实体瘤细胞、或不具有上皮来源的任何肿瘤细胞，循环的血管内皮细胞，肿瘤干细胞，干细胞，以及免疫细胞。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中，所述缓冲液的渗透压介于260～320mOsm/kg H₂O、pH为6.85～7.75，所述含糖溶液为选自以下的糖的溶液：右旋糖苷，多聚糖和泛影酸钠或其衍生物，或蔗糖，所述细胞分离介质在20℃下的比重为1.0722～1.0758克/毫升。

5.根据权利要求3所述的组合物，疾病动物模型为肿瘤动物模型，所述肿瘤细胞来自动物自身生长，或因引入人或动物的所有上皮来源的实体瘤细胞，包括但不局限于胰腺癌、肺癌、宫颈癌、食管癌、结直肠癌、乳腺癌、胃癌、肝癌等；或不具有上皮来源的肿瘤细胞，如黑色素瘤；循环的血管内皮细胞，肿瘤干细胞，血中胎儿细胞，干细胞，以及免疫细胞等。

6.一种用于从血液中快速获取循环的非血缘性有核稀有细胞的试剂盒，包括：

一种组合物，所述组合物由下述成份组成：缓冲液；包被了抗哺乳类动物血缘性有核细胞表面标识物抗体的磁性或非磁性免疫微球或免疫颗粒；细胞分离介质；其中，所述缓冲液的渗透压介于260～320mOsm/kg H₂O、pH为6.8～7.8，所述细胞分离介质在20℃下的比重为1.072～1.076克/毫升，所述细胞分离介质包含选自下列试剂中的任意一种或任意两种以上的成份：聚乙烯吡咯烷酮包被的胶质二氧化硅，多聚糖和泛影酸钠或其衍生物，一种含糖的溶液，由蔗糖和表氯醇聚合而成的非离子聚合物；

容纳所述组合物的容器；适用于保存外周血中循环稀有细胞的抗凝剂；适用于免疫荧光或免疫组织化学染色并保证细胞不会脱落的包被电荷的载玻片；以及所述试剂盒的使用说明书。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其中，所述免疫微球或免疫颗粒的比重高于所述细胞分离介质的比重，所述免疫微球或免疫颗粒共价或非共价结合有特异性地识别下述的抗哺乳类动物白细胞表面标示物的一种或多种的抗体：CD3、CD31、CD34、CD45、CD69、CD84、或CD102。

8.根据权利要求6或7所述的试剂盒，其中，所述循环的非血缘性有核稀有细胞来自人或动物的所有上皮来源的实体瘤细胞，包括但不局限于胰腺癌、肺癌、宫颈癌、食管癌、结直肠癌、乳腺癌、胃癌、肝癌等；或不具有上皮来源的肿瘤细胞，如黑色素瘤；循环的血管内皮细胞，肿瘤干细胞，血中胎儿细胞，干细胞，以及免疫细胞等。

9.根据权利要求1～5任一项所述的组合物或根据权利要求6～8任一项所述的试剂盒在用于各种疾病动物模型的生物医学实验中的应用，所述生物医学实验包括但不限于新药开发，新的生物标识物的发现。

10.根据权利要求9所述的应用，其中疾病动物模型包括所有与人类疾病相关的疾病模型，包括肿瘤、心血管疾病、神经系统疾病和糖尿病。