[发明专利]简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种细胞学检查方法，具体地说，是一种用于胸腹水、尿液、痰液、支气管刷检标本、妇科体检、宫颈癌普查及筛查人群中宫颈癌前病变等的简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法。

背景技术

液基薄层细胞检测技术是当今世界上先进的一种宫颈癌细胞学检查技术，它改变了常规宫颈涂片采取细胞的方法，标本采集后立即放入细胞保存液中.经自动细胞制片机处理，通过比重液离心后，将保存液中的粘液、红细胞、炎性细胞分离，收集余下的宫颈上皮细胞制成超薄层均匀细胞于载玻璃片上，经HE染色即可制成高质量制片。目前美国赛迪公司生产的全自动膜式液基超薄细胞制备系统新柏氏TCT2000处理器及其配套的专用试剂细胞保存液(PreserveCyt Solution)被誉为液基细胞学检测的金标准，但其设备和试剂价格昂贵，一人检查一次费用约180元。

中国专利CN1967196B于2006年9月14日公开了一种简易薄层液基细胞学细胞涂片制备方法，其中步骤包括：用宫颈管细胞刷及刮板收集样本、样本置于液基细胞保存液中、加入液基细胞处理液、振荡、离心分离、取弃上清液、加样枪吸取沉淀物样本、涂片、薄片烘干、95％的乙醇浸泡或喷雾固定、洗涤、染色。虽然该发明成本低廉，方法简便，易于普及推广，适用于大批量妇科普查、体检和基层医院的细胞学检查，其低廉的收费可降低患者负担，但其涂片质量达不到进口技术水准，敏感性仅为91.6％。

因此已知的薄层液基细胞学细胞涂片制备方法存在着上述种种不便和问题。

发明内容

本发明的目的，在于提出一种使用相配套的保存液、粘附分离液、粘液分解液和自然沉降装置，根据细胞比重的不同，把干扰诊断的有形成分隔离在分离液中丢弃，让需观察的细胞有效沉降在载玻璃片上的简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法。

本发明的另一目的，在于提出一种不需配备价格昂贵的配套设备，操作简便，一次制片数量不受限制的简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法。

本发明的又一目的，在于提出一种可以达到或超过进口试剂效果，又降低医疗费用，使医疗资源和资金匮乏的边远地区也可以使用最新的液基薄层细胞制片技术及进行大批量基层体检的简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法。

为实现上述目的，本发明的技术解决方案是：

一种简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法，用于妇科标本，胸腹水标本和痰、尿液等体液标本，其特征在于包括以下步骤：

a、标本预处理

把妇科标本连同保存瓶放在振荡器上震荡2～10分钟，吸取保存瓶里的中底层细胞作样本；或者胸腹水标本和尿体液标本使标本稍静置后弃上清液，留底部100～150毫升，混匀后取40～50毫升以2000转/分离心10分钟，取离心管底部1/3液体加入保存瓶作样本；或者痰标本加粘液分解液5～10毫升后放在振荡器上震荡2～10分钟，取分解后的液体痰加入保存瓶作样本(避开吸取食物沉渣)；

b、取普通离心管加入5毫升粘附分离液，后沿离心管壁缓慢加入经步骤a标本预处理后的等量样本；

c、将步骤b的样本混和物置于离心机中以1200～2000转/分离心5～10分钟，根据离心后沉淀物量弃离心管中上清液，然后混匀待用；

d、将写有编号的玻璃片放入制片配套设备自然沉降装置固定座的长槽中，玻璃片紧贴于固定座的长槽底边，固定后玻璃片磨砂端不超出底托外面，预防制片时损坏；

e、将沉降管一端竖立放在玻璃片上，使沉降管按顺时针方向旋转，手感沉降管拧紧到位，且置于在固定座的长槽中间；

f、将步骤c的离心后留取的底部样本混匀后加入沉降管中，如果发现沉降管与玻璃片之间有少许渗漏时，可将沉降管再拧紧少许，直到无渗漏为至；

g、静置自然沉降15～30分钟后，倒掉上层多余的分离液液体，将沉降管按逆时针方向旋转，去除沉降管，取下玻璃片即可；

h、对杂质多的标本可用冲洗液漂洗将玻璃片上沾有影响阅片的杂质洗掉，目测可明显看到玻璃片上有薄薄均匀的一层细胞；

i、稍干立即将玻璃片在95％酒精中固定10分钟以上即可根据诊断需要用水洗涤，再进行巴氏染色，HE染色或免疫组织化学染色后阅片。

本发明的简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法还可以采用以下的技术措施来进一步实现。

前述的方法，其中所述步骤a中，液基细胞保存液包含固定细胞作用的甲醛与乙醇，防腐剂双乙酸钠，抗凝剂枸橼酸钠，缓冲剂氯化钠，氯化钾及碳酸氢钠，螯合剂EDTA和溶解红细胞的冰醋酸。