[发明专利]一种获得耐受多种抑制剂酵母菌株的方法有效

申请号：	201110238038.9	申请日：	2011-08-18
公开（公告）号：	CN102296034A	公开（公告）日：	2011-12-28
发明（设计）人：	元英进;王昕;李炳志;丁明珠	申请（专利权）人：	天津大学
主分类号：	C12N1/18	分类号：	C12N1/18;C12R1/865
代理公司：	天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201	代理人：	陆艺
地址：	300072***	国省代码：	天津;12
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摘要：
搜索关键词：	一种获得耐受多种抑制剂酵母菌株方法
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【说明书】：

技术领域

本发明涉及一种得到耐受多种抑制剂酵母菌株的方法。

背景技术

能源一直是困扰世界各国经济和社会发展的重大问题，随着石油的贫乏，开发新的可代替能源成为各国学者关注的热点，生物能源更是受到广泛的关注和研究。生物乙醇作为可再生能源，具有污染性小，容易运输和贮藏的特点，在价格上也可与汽油相竞争，它是最有可能取代石油的新能源，同时在一定程度上可缓解能源危机，具有巨大的发展前景。以淀粉类和糖类作为发酵材料，采用微生物法发酵生产乙醇是一项成熟的技术，但高昂的原料成本使其工业应用受到限制。以农作物桔秆为代表的木质纤维素类生物质具有廉价，来源丰富，对环境污染小的特点，是未来燃料乙醇产业规模化发展公认的原料来源。

但是在纤维素乙醇生产工艺中，只有有效的破坏木质纤维素的致密结构才能使纤维素原料高效的转化为可发酵糖类，因此纤维素原料在水解前一般需要进行预处理。但是广泛应用的一些化学预处理方法通常在高温高压的条件下进行，会伴随着产生一些抑制剂，如呋喃类、弱酸类、酚类等。这些抑制剂严重影响菌体的生长、乙醇的产率、生物量和细胞内正常的分子机能。作为乙醇生产的传统菌株——酿酒酵母，具有底物利用高效性，产物专一性和稳健性等优点，但是它对抑制剂环境敏感，被抑制作用明显。传统的脱毒步骤会增加生产的成本，所以获得天然的耐受性酵母菌株从而实现原位脱毒和乙醇高效发酵在纤维素乙醇研究领域具有重要的意义。

目前获得耐受菌株的方法多是通过进化工程和基因工程。微生物的一个重要特性就是在压力环境下改变细胞内部的物理条件来适应抗性环境。已有文献报道酿酒酵母在遇到生长环境剧烈变化时，可以通过引发自身的应激响应机制，同时细胞内多种分子机制作出响应，如信号传导，基因表达调控和代谢调节等，从而使细胞对压力环境产生适应。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种获得耐受多种抑制剂的酿酒酵母菌株的方法。

本发明的技术方案概述如下：

一种获得耐受多种抑制剂酵母菌株的方法，其特征是包括如下步骤：将活化后的酿酒酵母菌株接种于含有纤维素水解液抑制剂的传代培养基中培养；将生长到稳定期的细胞分离后，再接种到相同的含有纤维素水解液抑制剂的新鲜传代培养基中培养；获得的稳定期的菌株，即为耐受多种抑制剂酵母菌株。

所述的纤维素水解液抑制剂为糠醛、苯酚和乙酸。

所述糠醛在传代培养基中的含量为1.04g/L-1.3g/L，所述乙酸在传代培养基中的含量为4.24g/L-5.3g/L，所述苯酚在传代培养基中的含量为0.4g/L-0.5g/L。

所述酿酒酵母菌为安琪酵母，BY4741或BY4743。

利用本发明的方法获得耐受多种抑制剂酵母菌株，对纤维素水解液抑制剂的耐受性提高，生长性状稳定，从而实现水解液的原位脱毒。为推进纤维素乙醇的工业化生产具有重要的意义。

附图说明

图1是安琪酵母在糠醛的含量为1.3g/L，乙酸的含量为5.3g/L，苯酚的含量为0.5g/L低糖培养基中传代培养的前三代生长曲线；

图2是安琪酵母在糠醛的含量为1.04g/L，乙酸的含量为4.24g/L，苯酚的含量为0.4g/L高糖培养基中传代培养的前三代生长曲线；

图3是安琪酵母在糠醛的含量为1.3g/L，乙酸的含量为5.3g/L，苯酚的含量为0.5g/L高糖培养基中传代培养的前三代生长曲线；