[发明专利]老年斑磁共振纳米诊断试剂及其制备方法

权利要求书

1.一种老年斑磁共振纳米诊断试剂，其特征在于，它是结合有人体免疫缺陷病毒(HIV-1)的转录活化因子肽段(HIV-1 Tat肽段)和Aβ₄₀肽段的超顺磁性纳米氧化铁颗粒(USPIO)，即Tat-USPIO-Aβ₄₀。

2.根据权利要求1所述的老年斑磁共振纳米诊断试剂，其特征在于含有生理可接受的稀释剂。

3.根据权利要求2所述的老年斑磁共振纳米诊断试剂，其特征在于所述的稀释剂可以是PBS缓冲液或生理盐水。

4.根据权利要求2或3所述的老年斑磁共振纳米诊断试剂，其特征在于，以铁元素含量计量该诊断试剂中Tat-USPIO-Aβ₄₀的浓度为：其铁元素含量为0.01-20摩尔/升。

5.据权利要求1所述的老年斑磁共振纳米诊断试剂，其特征在于，所用的超顺磁性纳米氧化铁颗粒的粒径大小为6-10纳米。

6.结合有人体免疫缺陷病毒(HIV-1)的转录活化因子肽段(HIV-1 Tat肽段)和Aβ₄₀肽段的超顺磁性纳米氧化铁颗粒在制备老年斑磁共振纳米诊断试剂中的应用。

7.一种老年斑磁共振纳米诊断试剂的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、在超顺磁性纳米氧化铁颗粒表面连上氨基官能团，得到表面官能化的超顺磁性纳米氧化铁颗粒；

步骤二、将5-10重量份的3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(SPDP)溶于1-2体积份的二甲基亚砜中，得交联剂溶液，再将该交联剂溶液与浓度为0.1-0.2mol/L、PH＝7.4-8的磷酸盐缓冲溶液(如：PBS溶液、D-Hanks溶液等)混合，得到交联剂溶液与磷酸盐缓冲溶液的混合液，交联剂溶液与磷酸盐缓冲溶液的体积用量比为1∶1-2；

步骤三、将表面官能化的超顺磁性纳米氧化铁颗粒加入到步骤二得到的混合液中，表面官能化的超顺磁性纳米氧化铁颗粒与该混合液的重量/体积用量比为3-5∶2-3，在室温下放置60～120分钟，置于超滤管中，6000-8000转/分离心50-60分钟，过滤去除杂质和未反应的交联剂溶液，得到经交联溶液处理过的表面官能化的超顺磁性纳米氧化铁颗粒(USPIO)磷酸盐溶液；

步骤四、取经交联溶液处理过的表面官能化的超顺磁性纳米氧化铁颗粒(USPIO)溶液3-5体积份，向其中加入1-2体积份的浓度为0.02mol/L的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶液和1-2体积份的浓度为0.2mol/L的3-二甲胺基丙基碳二亚胺(EDC)溶液，于37℃下放置30-90分钟，然后再加入3-5重量份的人体免疫缺陷病毒HIV-1的转录活化因子肽段(HIV-1 Tat肽段)和3-5重量的份Aβ₄₀肽段，混合后室温下放置10-12小时；置于超滤管中，6000-8000转/分离心40-60分钟，过滤去除杂质和未反应的溶液，得到结合有人体免疫缺陷病毒(HIV-1)的转录活化因子肽段(简称：HIV-1 Tat肽段)和Aβ₄₀肽段的超顺磁性纳米氧化铁颗粒，即老年斑磁共振纳米诊断试剂。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤一所述的在超顺磁性纳米氧化铁颗粒表面连上氨基官能团，得到表面官能化的超顺磁性纳米氧化铁颗粒的具体方法是：超顺磁性纳米氧化铁颗粒加入絮凝剂，于8000-9000转/分离心10-20分钟，弃上清，下部沉淀物均匀溶解于蒸馏水中；取2-4份体积份的该溶液与10-15体积份的NaBH₄的NaOH溶液中，室温下均匀混合，于惰性气体环境下升温至60-70℃，边搅拌边加入3-5体积份的表氯醇，反应10-12小时后停止反应；加入絮凝剂，5000-7000转/分离心3-5分钟，均匀溶解于蒸馏水中，重复以上加入絮凝剂、离心、溶解于蒸馏水的操作三至五次；然后，于50-60℃惰性气体环境下，加入5-10体积份乙二胺，反应10-12小时后停止反应，加入絮凝剂，5000-7000转/分离心3-5分钟，均匀溶解于蒸馏水中，重复以上加入絮凝剂、离心、溶解于蒸馏水的操作三至五次，得到表面官能化的USPIO，均匀溶解于PH值为7.4-8的磷酸缓冲溶液(PBS)中保存，其中所述的NaBH₄的NaOH溶液的配制方法是：将1-3重量份的NaBH₄溶于浓度为1.8-2mol/L的NaOH溶液。