[发明专利]一种悬浮细胞的免疫荧光染色方法

权利要求书

1.一种悬浮细胞的免疫荧光染色方法，其特征在于，所述的染色方法包括以下步骤：先收集细胞于离心管中，800g离心收集细胞，然后分别加入多聚甲醛固定、Triton-X100通透、1% BSA封闭，再依次加入一抗、二抗孵育，以上每步操作后都采用800g离心的方法进行洗涤，最后DAPI染色后，滴至载玻片上封片观察。

2.根据权利要求1所述的染色方法，其特征在于，所述的染色方法包括以下步骤：

a、收集细胞或大细胞团（细胞总数为10⁶-10⁷）于2ml离心管中；

b、加入2ml PBS，温和上下颠置，800g离心5min，弃上清；

c、重复b步骤，去除培养基中血清的影响；

d、加入2ml蒸馏水，温和上下颠置，800g离心5min，弃上清；

e、加入1ml 4% 多聚甲醛，放置10min；其间每隔2min轻弹管底数次，使细胞充分接触溶液；800g离心5min，弃上清；

f、重复b、c、d步骤；

g、加入1ml 0.4% Triton-X-100通透细胞，放置10-20min；其间每隔5min轻弹管底数次，使细胞充分接触溶液；800g离心5min，弃上清；

h、重复b、c、d步骤；

i、加入1ml 1% BSA或山羊血清，室温放置30min，以封闭细胞表面的非特异性抗原；其间每隔5min轻弹管底数次，使细胞充分接触溶液；800g离心5min，弃上清；

j、加入一抗，室温放置2h或者4℃过夜；

k、重复b、c、d步骤；

l、避光加入荧光标记的二抗，室温放置1h；

m、重复b、c、d步骤；

n、加入DAPI和10ul蒸馏水，室温避光放置5min；

o、用移液器将细胞滴至载玻片上，晾干，加含抗荧光淬灭剂的封片剂封片。

3.根据权利要求1所述的染色方法，其特征在于，所述的细胞为悬浮细胞。