[发明专利]改良高特异性PCR方法

说明书

技术领域

适用于各种和基因表达相关的实验和研究领域。

技术背景

聚合酶链式反应简称(Polymerase Chain Reaction)，简称PCR。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究，还可用于疾病的诊断或任何有DNA、RNA的地方，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。虽然如此，许多PCR实验中仍然经常出现假阳性和非特异扩增，为许多实验带来了巨大的困扰。因此，一种高特异性性的PCR方法对于科学实验和研究显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高特异性的PCR方法。

本发明的整体技术构思是：热启动PCR和降落PCR可以在一定程度上提高PCR的特异性，本文将这两种方法结合起来，并在一定程度上进行了改进，最大程度上减少非特异性产物和背景，从而得到一种高特异性的PCR方法。

高特异性的改良PCR方法如下：

(1)将蜡丸同时加入dNTP，MgCl₂，引物以及部分10×缓冲液，加热80蜡丸融化，室温冷却，在表面形成一种蜡隔层。

(2)在蜡隔层上加入DNA Taq酶，DNA模板，以及部分10×缓冲液，进入PCR循环。

(3)PCR程序设计：将复性温度初始值设置为70℃，每次下降1℃直至最适退火温度，每个温度循环2-4次。

(4)第三步完成以后，再在变性，复性，延伸，最适程序下进行30个循环左右。

(5)最后，72℃后延伸5-10min。

(6)最后在4℃下保存。

本发明不仅能够避免由于引物和非靶位点的错配和引物形成二聚体引起的扩增，还可以避免由于Mg²⁺不适当，Tm(变形温度)值和Ta(退火温度)值相距较远的一对引物，复杂的模板DNA等原因引起的假阳性的出现。与传统的PCR相比，能够显著增加特异产物的量，同时降低或消除了非特异性产物。

以下结合实例对本发明进一步描述

高特异性的改良PCR方法如下：

(7)将蜡丸同时加入dNTP，MgCl₂，引物以及部分10×缓冲液，加热80蜡丸融化，室温冷却，在表面形成一种蜡隔层

(8)在蜡隔层上加入DNA Taq酶，DNA模板，以及部分10×缓冲液，进入PCR循环。

(9)PCR程序设计：将复性温度初始值设置为70℃，每次下降1℃直至最适退火温度，每个温度循环2-4次。

(10)第三步完成以后，再在变性，复性，延伸，最适程序下进行30个循环左右。

(11)最后，72℃后延伸5-10min。

最后在4℃下保存。