[发明专利]一种牛血清白蛋白提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及白蛋白的制备方法，具体涉及一种牛血清白蛋白提取方法。

背景技术

牛血清白蛋白(BSA) ，又称第五组分，是牛血清中的一种球蛋白，包含583个氨基酸残基，分子量为66.430 kDa，等电点为4.7，是生物学诸多学科及医、药学各领域广泛应用的生化试剂，也可用作医药保健食品、调味品。

牛血清白蛋白最常用的制备方法是以牛血为原料分离出血清，用硫酸铵分级沉淀后，经辛酸处理精制而得；中国专利文献CN 1544470C公开了一种牛血清白蛋白热乙醇法提取工艺，其方法是采用3.8%枸橼酸钠抗凝血得到血浆，加热加入辛酸钠，调pH值后加乙醇，再经过滤、脱盐、浓缩、冻干后得牛血清白蛋白。上述牛血清白蛋白制备方法中需要添加许多成本较高的盐类（如枸橼酸钠、辛酸钠等）及有机化学物质（乙醇溶剂等），制备出白蛋白的纯度难以保证，而且生产工艺较复杂，难以进行大批量生产。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种纯度高、工艺流程简单、成本低的牛血清白蛋白提取方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：

一种牛血清白蛋白提取方法，包括以下步骤：

（1）取新鲜的牛血，离心分离后取上清液，加入与上清液等体积的无菌无热原去离子水，再按上清液体积的1/4～3/4加入60～70℃的0.024M软脂酸钠溶液，混匀后静置50～100 min；

（2）向上步所得溶液中加稀盐酸，调节溶液pH至4.0～6.5， 60～70℃下水浴1～2h，过滤得滤液；

（3）按上清体积的40%向上步所得滤液中加入3 mol/L HCl，混匀后再加入氯化钠，使其在溶液中的质量浓度达到4%，0～4℃下放置30～60min；

（4）静置后过滤得沉淀，按上清体积的4～6%向沉淀中加入无菌无热原去离子水，加稀碱溶液，调溶液pH至9.0～10.0；

（5）待沉淀完全溶解后，再加稀盐酸调溶液pH至8.0～9.0，在无菌无热原去离子水中透析10～16h；

（6）透析液放入冻干机中，45～50小时后取出，得蛋白粉。

在所述步骤（1）中，离心分离的转速为2800～3200r/m，时间为10～20 min。

在所述步骤（2）、（5）中，所用稀盐酸的浓度为1mol/L。

在所述步骤（4）中，所用稀碱溶液为1mol/L NaOH溶液。

本发明具有积极有益的效果：

1.纯度高、质量好，易于保存，在生产过程中只加少量保护剂，不含其它盐类及化学物质，因而保证了成品的纯度，产品可室温下保存。

2.常规方法中提取白蛋白采用3.8%枸橼酸钠抗凝血得到血浆，而本发明采用血清，避免加入枸橼酸钠，一方面节约成本，另外减少化学原料的参入，提高了白蛋白的纯度；常规提取白蛋白的辛酸法，辛酸的价格远高于软脂酸，同时软脂酸为十六烷酸，较辛酸结合白蛋白的能力强，保护白蛋白的作用相应也提高。

3.本发明用料少，工艺流程短，操作简单，适合批量生产，生产效率比冷盐析法（耗时需5天）提高了5倍；收率高，一般在1.8～2.0 ％；软脂酸的价格远低于辛酸，因此生产成本大大降低，如与冷盐析法相比，成本低50％。

具体实施方式

以下结合具体实施例进一步阐述本发明。下述实施例中所用的原料及设备，如无特别说明，均为市售。

实施例1  一种牛血清白蛋白提取方法，包括以下步骤：

取新鲜的牛血，3000r/m离心10min，取上清液，-20℃冻存备用。取充分融化后的牛血清30ml，加去离子水30ml，充分搅匀，再加入70℃的0.024M软脂酸钠溶液20ml，放置75min。测得混合溶液的pH为8.76，加1M HCl 1.6ml，使pH至5.16，水浴1.5h（温度从65℃升至70℃）。用单层普通滤纸进行过滤，得滤液60ml，加3M HCl 12ml，NaCl 2.88g，4℃放置30min，使用双层过滤，将沉淀加水1.7ml，搅成糊状，加1M NaOH 3.5ml，pH至9.98，再加1M HCl 0.11ml至pH8.45，在去离子水中透析12h。将透析液13.5ml，放入冻干机中，48小时后取出，得蛋白粉。

实施例2  一种牛血清白蛋白提取方法，包括以下步骤：

取新鲜的牛血，3000r/m离心10min，取上清，-20℃冻存备用。