[发明专利]一种细胞摄取阿霉素的定量测试方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种细胞摄取阿霉素的定量测试方法。

技术背景

阿霉素(Doxorubicin)，别名羟柔红霉素、羟正定霉素、多柔比星，是临床常用的抗生素累抗肿瘤药，抗瘤谱广，疗效广，可治疗多种肿瘤。目前，国内外对于阿霉素的定量分析大多采用液相色谱或液相色谱-质谱联用技术。但这些测试方法价格昂贵，测试条件复杂，受外界条件影响较大，测试过程繁琐费时。对于微量组分的测定，在较高浓度下，紫外可见光具有较好的灵敏度，但是其测量范围较窄，而在较低浓度下其测量灵敏度不够。

在国内外的文献中，对于细胞摄取量大都采用荧光倒置显微镜拍照与细胞流式仪结合的方式来确定其摄取强度，但是由于其时间周期太长，只能定性测定。荧光分光光度计具有比紫外分光光度计具有更高的灵敏度，对于较低浓度的阿霉素溶液也快速简单的测试出来，且测试费用较低。鉴于以上所述，本发明采用荧光分光光度计测定细胞摄取阿霉素含量。

发明内容

本发明目的在于提供一种简单易行的细胞摄取阿霉素的定量测试方法。

本发明采用荧光分光光度计对阿霉素进行定量的测定，包含以下步骤：

(1)配制一定浓度的阿霉素溶液，在荧光分光光度计下扫描其激发波长和发射波长，确定其激发波长和发射波长；

(2)配制一系列浓度的阿霉素溶液，以确定的激发波长和发射波长来测定其荧光强度(F)。以荧光强度(F)对浓度，绘制标准曲线，得到回归直线方程；

(3)测定经处理的细胞摄取阿霉素溶液的荧光强度(F)，由步骤(2)的回归直线方程计算出细胞摄取的阿霉素的准确浓度。

本发明所述的激发波长和发射波长分别为(Ex)＝497nm、(Em)＝555nm。

所述的细胞的处理是采用1％十二烷基硫酸钠涡旋混合经离心处理，得到阿霉素溶液，溶液中的阿霉素浓度范围为10-1000ng/mL。

本发明的测试方法操作简便、精确度高、重现性好。

附图说明：

图1为阿霉素溶液在激发波长(Ex)＝497nm、发射波长(Em)＝555nm处的荧光强度-浓度标准曲线。

具体实施方式

通过下面实例说明本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围，不局限于此。

实施例1

以超纯水为溶剂配置2μg·mL-1的盐酸阿霉素溶液，用荧光分光光度计扫描其激发波长和发射波长。

精密配置质量浓度ρ分别为10，20，50，100，200，500，1000ng/mL，用荧光分光光度计于上述所测定的激发波长，发射波长下分别测定荧光强度，同一样品分别测定三次，取三次试验的平均值，并考察其日内，日间精密度。以质量浓度ρ为横坐标，荧光强度(F)为纵坐标进行线性回归得到标准曲线。