[发明专利]多肽类似物Tat-HA-NR2B9C及其制备方法和应用

说明书

 

技术领域

本发明属于生物制药领域，尤其涉及多肽类似物Tat-HA-NR2B9C及其制备方法和应用，该多肽类似物能特异性解除NMDA受体和PSD-95蛋白之间耦联，阻断兴奋毒性的信号转导，发挥保护脑缺血损伤。

 

背景技术

N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体是一种门控离子通道复合物，主要分布于大脑皮层、海马、纹状体等部位，是兴奋性氨基酸神经递质传递的重要基础，也是维持正常中枢神经系统功能的关键因素。在生理条件下，NMDA受体不仅介导了突触可塑性，神经元生长和分化，还通过突触后的信号调控突触的去极化以维持一定的生理功能。尽管兴奋性氨基酸信号对于维持大脑的生理功能非常重要，但同时也是引起神经障碍性疾病的关键因素。在脑卒中的发病机制中，通过参与众多病理变化和生化过程，NMDA受体在缺血性脑损伤中起关键作用。通过对脑缺血模型的病理研究发现，NMDA受体过度激活引起大量的Ca²⁺内流，细胞内Ca²⁺的瞬息变化会触发兴奋性毒性，并导致蛋白酶、核酸内切酶的激活、一氧化氮（NO）的生成、自由基的产生以及线粒体膜渗透性的改变，从而导致神经元的损伤和死亡。因此，NMDA受体已经成为防治脑卒中等神经系统疾病药物研制的重要靶点之一。

尽管大量的临床前理论研究表明NMDA受体拮抗剂，如：selfotel、eliprodil、licostinel、lanicemine、UK2240455、SM231900等对缺血性脑损伤具有治疗作用，但因疗效不确切或不良反应严重，所有临床研究使用的NMDA受体拮抗剂均被停用。NMDA受体属配基和电压双门控的Ca²⁺通道，现已发现并克隆出的NMDA受体亚单位有NR1、NR2（包括NR2A、NR2B、NR2C和NR2D）、NR3和NR4亚单位。NR1在中枢神经系统内广泛分布，是NMDA受体必需的亚单位；NR2、NR3和NR4则呈特异性分布。NMDA受体在不同脑区可以由不同的亚单位组成，并产生不同的电生理学及药理学特性。NR2B与PSD95蛋白结合产生一系列神经毒性反应，导致神经元的死亡或凋亡。PSD-95通过第二个PDZ结构域与NMDA受体的NR2B羧基端的tSXV基序结合，同时也可以与神经元型一氧化氮合酶（nNOS，neuronal nitric oxide synthase）结合，过度激活nNOS使NO大量释放，从而引起神经兴奋毒性，导致脑卒中等疾病发生。从治疗的角度看，抑制或者突变NMDA受体是不可行的，因为NMDA受体具有广泛的生理效应，NMDA受体水平的改变将严重干扰机体功能。临床数据也表明NMDA受体拮抗剂是无效的，甚至是有害的。选择性的NR2B拮抗剂是目前抗脑卒中药物研究的热点。有实验表明，体内基因突变或者体外抑制PSD95的表达并不影响NMDA受体的活性，PSD-95缺失可以引起NO生成减少，减低NMDA受体过度激活导致的神经兴奋毒性。本实验室的研究还发现，NMDA/PSD-95/nNOS偶联通路对神经元再生起抑制作用。因此阻断该通路的信号传导可能有利于减轻缺血性损伤，促进脑卒中后神经元的再生，从而改变脑缺血诱导的记忆功能损伤。由此，探索NMDA受体/PSD-95解耦联剂成为我们寻找抗脑卒中等神经疾病药物的新策略。

 

发明内容

技术问题：本发明旨在提供多肽类似物Tat-HA-NR2B9C及其制备方法和应用。

技术方案：多肽类似物Tat-HA-NR2B9C，它的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所述。

多肽类似物Tat-HA-NR2B9C，它的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所述。

包含SEQ ID NO.2所述核苷酸序列的重组质粒。

包含SEQ ID NO.2所述核苷酸序列的重组质粒pED-Tat-HA-NR2B9C。

制备多肽类似物Tat-HA-NR2B9C的方法，以pED的L-ansB-C基因的C端为模板，通过加端PCR的方法获得Tat-HA-NR2B9C多肽核酸序列，并转化宿主细胞进行培养，获得重组的pED-Tat-HA-NR2B9C。

所述宿主细胞为大肠杆菌细胞或昆虫细胞。

所述多肽类似物Tat-HA-NR2B9C在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用。