[发明专利]一次性同时定量测定多种抗生素的方法

说明书

技术领域

本发明属于抗生素的检测领域，特别涉及一种一次性同时定量测定多种抗生素的方法。

背景技术

自1928年发现青霉素以来，抗生素被大量用于人和动物的疾病治疗，同时以亚治疗剂量长期添加于动物饲料中预防疾病和促进动物生长。目前被广泛使用的抗生素，按照化学结构可分为β-内酰胺类、喹诺酮类、四环素类、氨基葡糖苷类、大环内酯类、多肽类等；按照用途则主要包括麻醉剂、抗酸剂、驱虫剂、类固醇类、非固醇类、抗炎药、抗菌剂、杀菌剂、防腐剂、利尿药、乳化剂、催情剂、镇静剂和促生长素等。有研究表明，抗生素摄入后除少部分残留在体内，85％以上以原药和代谢产物的形式经由病人与动物的粪尿排出体外进入生态环境，经不同途径对土壤和水体造成污染。近年来，由抗生素的滥用导致的环境污染与生态毒害问题引起了广泛的关注。

随着人们对于抗生素污染问题的重视度逐渐提高，已经有越来越多检测抗生素含量的方法被研究和报道。目前，测定抗生素的方法主要有微生物法、免疫分析法、薄层色谱法和仪器分析法。微生物法是选择对检测药物敏感的实验菌在一定的条件下，其抑菌圈的大小与药物浓度呈一定的线性关系。在实际检测中，微生物法的影响因素较多，菌种不易筛选，精确度和灵敏度较低。免疫分析法适用于复杂介质中痕量组分的分离和检测，它是以抗原、抗体的特异性结合和可逆性反应为基础的分析技术，具有较高的选择性和灵敏度。薄层色谱法由于操作比较简单而且快速，因此被用于药物的快速定性鉴定，但是方法的灵敏度和检测限相对于高效液相色谱法较差。仪器分析法包括气相色谱法、液相色谱法以及液相色谱-质谱联用法。高效液相色谱法因灵敏度高、特异性好而被广泛应用。目前，色谱-质谱联用法是对复杂样品进行定性、定量分析的最佳方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种一次性同时定量测定多种抗生素的方法，该方法简便、省时、高效且定量准确，只需要一次实验，即可定量测定样品中所存在的多种抗生素；该方法灵敏度高，可用于微量检测。

本发明的一次性同时定量测定多种抗生素的方法，包括：

(1)样品处理：

将样品提取液以1滴/s的速度经过固相萃取柱，待上清液完全流出后，依次用2-8mL水和2-8mL体积浓度为5％的甲醇水溶液淋洗，弃去全部流出液；然后将上述的固相萃取柱减压抽干2-8min，再用8-12mL体积浓度为10％的甲醇乙酸乙酯溶液洗脱，将洗脱液在35-45℃吹氮气，浓缩至干得残渣，用1mL标准溶解液溶解所述的残渣后过0.45μm滤膜，得样品滤液；

(2)方法建立：

液相色谱条件为：色谱柱Inertsil ODS-3，流速0.4mL/min，检测波长：265nm；进样量10μl，流动相为乙腈和体积浓度为0.2％甲酸水溶液，洗脱梯度见表1，得液相色谱图；

表1色谱洗脱梯度