[发明专利]一种用于研究模拟微重力效应的三维类骨组织的制备方法

权利要求书

1.一种用于研究模拟微重力效应的三维类骨组织的制备方法，其特征在于用于研究模拟微重力效应的三维类骨组织的制备方法，按以下步骤进行：一、将明胶放入37℃孵箱内溶解，然后将0.1mol/L的PBS缓冲液或质量浓度为0.85％～0.9％的生理盐水与海藻酸钠、溶解的明胶和羟基磷灰石混合，得到混合溶液，混合溶液中海藻酸钠的质量浓度为1％～5％，明胶的质量浓度为0.5％～5％，羟基磷灰石的质量浓度为0.01％～0.1％；二、成骨细胞的诱导；三、破骨细胞的诱导；四、将诱导后的成骨细胞和破骨细胞与步骤一制得的混合溶液混合，制成细胞密度为1×10⁶～5×10⁶个/mL的混合细胞悬液，采用针头将混合细胞悬液逐滴加入到25～100mmol/L的二价阳性离子溶液中，静置5～10min，得到包裹混合细胞的微球；五、将包裹混合细胞的微球放入质量浓度为0.1％～3％的海藻酸钠溶液中静置5～20min后，然后放入质量浓度为0.5～2％的多聚赖氨酸溶液中静置5～20min，最后放于α-MEM培养基进行三维培养1～2周，即形成三维类骨组织。

2.根据权利要求1所述的一种用于研究模拟微重力效应的三维类骨组织的制备方法，其特征在于步骤二中成骨细胞的诱导方法，按以下步骤进行：向α-MEM培养基中添加50mmol/L的抗坏血酸、1mol/L的β甘油磷酸和1mmol/L的地塞米松，使α-MEM培养基中抗坏血酸的终浓度为0.05mmol/L、β甘油磷酸的终浓度为10mmol/L、地塞米松的终浓度为1×10^-7mol/L，即得MC3T3-E1细胞的诱导培养基，利用诱导培养基培养MC3T3-E1细胞5～10天，即完成成骨细胞的诱导。

3.根据权利要求1所述的一种用于研究模拟微重力效应的三维类骨组织的制备方法，其特征在于步骤三中破骨细胞的诱导方法，按以下步骤进行：将小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7接种于6孔培养板上，用α-MEM全培养液于37℃、体积分数为5％CO₂的细胞培养箱中培养，1d后更换为破骨细胞培养液，之后每隔3d换1次破骨细胞培养液，培养1～2周，即完成破骨细胞的诱导；所述的α-MEM全培养液中含体积分数为15％的胎牛血清、100U/mL的青霉素、100mg/L的链霉素和0.01mol/L的HEPES缓冲液，所述的破骨细胞培养液为含有30ng/mL巨噬细胞集落刺激因子和50ng/mL破骨细胞分化因子的α-MEM培养基。

4.根据权利要求1或2所述的一种用于研究模拟微重力效应的三维类骨组织的制备方法，其特征在于步骤一中海藻酸钠的质量浓度为2％～4％。

5.根据权利要求4所述的一种用于研究模拟微重力效应的三维类骨组织的制备方法，其特征在于步骤一中明胶的质量浓度为1％～4％。

6.根据权利要求5所述的一种用于研究模拟微重力效应的三维类骨组织的制备方法，其特征在于步骤一中羟基磷灰石的质量浓度为0.03％～0.07％。

7.根据权利要求6所述的一种用于研究模拟微重力效应的三维类骨组织的制备方法，其特征在于步骤四中制成细胞密度为3×10⁶个/mL的混合细胞悬液。

8.根据权利要求7所述的一种用于研究模拟微重力效应的三维类骨组织的制备方法，其特征在于步骤四中将混合细胞悬液逐滴加入到40～80mmol/L的二价阳性离子溶液中。

9.根据权利要求8所述的一种用于研究模拟微重力效应的三维类骨组织的制备方法，其特征在于步骤五中放入质量浓度为0.5％～2.5％的海藻酸钠溶液中。

10.根据权利要求9所述的一种用于研究模拟微重力效应的三维类骨组织的制备方法，其特征在于步骤五中放入质量浓度为1％～1.5％的多聚赖氨酸溶液中。