[发明专利]斜纹夜蛾基因工程病毒1号及其构建方法

权利要求书

1. 一种对野生型病毒SpltMNPV                                                 进行缺失和重组的斜纹夜蛾基因工程病毒，其特征在于：其保藏信息为：保藏单位：中国典型培养物保藏中心；保藏编号：CCTCC NO:V201027；分类命名：斜纹夜蛾基因工程病毒1号(SpltNPV-△egt -egfp)，在基因组中缺失了egt基因即蜕皮激素尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶基因，在缺失egt基因的位点处，插入由SpltMNPV  的多角体蛋白基因ph启动子控制的标记基因即增强型绿色荧光蛋白egfp基因。

2. 一种构建权利要求1所述的斜纹夜蛾基因工程病毒1号(SpltNPV-△egt -egfp) ，保藏编号CCTCC NO: V201027的方法，其特征是包括以下步骤：

(1) 以SpltMNPV  DNA为模板，分别扩增出同源重组臂egt上游非编码端即Egt up和 egt 3′端的部分片段及其下游非编码端即Egt down，扩增产物回收纯化后分别经Kpn I /Xho I， Xba I/ Sac I双酶切后依次克隆到载体pBluescript II SK(+)上，获得中间质粒pSK- Egtup- Egtdown；

(2) 在这两个片段之间，采用分子克隆技术插入SpltMNPV 的多角体蛋白基因启动子Pph启动控制的增强型绿色荧光蛋白基因egfp，获得重组质粒 pSK-△egt-Pph- egfp；

(3) 将重组质粒pSK-△egt-Pph- egfp和SpltMNPV  基因组DNA共转染斜纹夜蛾Spli细胞，经基因等位交换，获缺失egt基因的表达绿色荧光蛋白的重组病毒SpltMNPV-△egt-egfp，再经多轮荧光斑法纯化处理，得到纯的重组病毒即斜纹夜蛾基因工程病毒1号(SpltNPV-△egt -egfp) CCTCC NO:V201027。