[发明专利]一种丛枝菌根菌整体孢子玻片标本的制作方法

说明书

技术领域

本发明涉及标本的制作方法，具体涉及一种丛枝菌根菌整体孢子玻片标本的制作方法。

背景技术

真菌孢子的形态特征是对真菌分类鉴定的主要特征之一。制作丛枝菌根菌孢子的玻片标本，对于相关的教学、研究、技术推广等具有重要的意义，也是生物标本厂一个很好的生产项目。

丛枝菌根菌的孢子较大，多数种类的孢子直径在100～200μm之间，大的可达400μm以上（如木薯球囊霉 Glomus manihotis的孢子可达450μm，易误巨孢囊霉Gigaspora decipiens 的孢子可达490μm），而且这类孢子的壁不坚实，稍遇压力即破裂，这给制作整体孢子的玻片标本造成了一定的困难。

传统的玻片标本制作方法是在载玻片上滴上少量的胶液，然后将孢子放在胶液中，再在上面盖上盖玻片，待胶液干燥将盖玻片黏着固定后，即成为永久玻片标本。由于多数丛枝菌根菌的孢子较大，无法用少量的胶液在载玻片与盖玻片之间形成足以盛载孢子的位置，并将载玻片、孢子和盖玻片黏着固定在一起。若用大量的胶液，虽然可在载玻片与盖玻片之间形成足以盛载孢子的位置，并将载玻片、孢子和盖玻片黏着固定在一起，但胶液在干燥过程中收缩将使盖玻片对孢子的压力增大，致使孢子破裂，无法制作出整体孢子（孢子完整、不破裂）的玻片标本。

发明内容

本发明的目的是提供一种丛枝菌根菌整体孢子玻片标本的制作方法。

为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案，一种丛枝菌根菌整体孢子玻片标本的制作方法，包括以下步骤：

（1）将凹圆载玻片平放在操作台上，凹面向上；

（2）向凹穴中滴加阿拉伯胶混合液；

（2）借助于体视显微镜，用毛细吸管从湿筛倾析法筛出的丛枝菌根菌孢子中吸取孢子，用滤纸吸去孢子表面的水分后放置在胶液表面；

（4）把步骤（3）中放置孢子的载玻片平放在烘箱中干燥8～12个小时；

（5）取出烘干的载玻片平放在操作台上，用吸管在载玻片的凹口外围涂上封片胶，然后盖上盖玻片；

（6）把上述制好的玻片标本平放在烘箱中，经8～12个小时干燥，即制成整体孢子玻片标本。

一个载玻片凹穴中的胶液表面可仅放1个孢子，也可放数个孢子；放数个孢子时，使孢子间保持一定的距离，不要使孢子挤在一起，以免影响观察效果。

步骤（4）、（6）所述的烘箱的温度为45～55℃。

所述的封片胶为作粘合剂的树胶，优选加拿大树胶。

用本发明方法制作的丛枝菌根菌整体孢子玻片标本可利用体视显微镜观察完整孢子的外观形态特征，并可长期保存。

本发明的优点在于：采用凹圆载玻片，将孢子封存在凹圆载玻片的凹穴中，凹圆载玻片的凹穴底部铺一层胶，孢子被黏着固定在胶的表面，盖玻片与孢子之间有一定的空间距离，可保证大而且壁不坚实的丛枝菌根菌孢子在永久玻片标本中保持完整的外观形态，不破裂。

具体实施方式

实施例1  本实施例丛枝菌根菌整体孢子玻片标本的制作方法如下所述：

（1）将凹圆载玻片平放在操作台上，凹面向上。凹圆载玻片规格为：长宽76×26mm，厚度1.2～1.5mm，凹穴直径15～18mm，凹穴深度0.6～0.8mm；

（2）用吸管向凹穴中滴一滴阿拉伯胶混合液，胶液的用量控制在液面距凹口处的距离要大于所用孢子的直径；

阿拉伯胶混合液配方：30g阿拉伯胶、200g水合三氯乙醛、20mL甘油、50mL蒸馏水；

配制方法：将阿拉伯胶粉放入烧杯，徐徐加入蒸馏水并搅拌，同时将烧杯水浴加热，然后慢慢加入水合三氯乙醛混合液，边加边搅拌均匀，最后加入甘油拌匀，倒入细颈瓶中，盖上玻塞，置60 ℃温箱内24h，并在温箱中用洁净玻璃棉和纱布过滤，保存在黑暗处，备用；

（3）借助于体视显微镜，用毛细吸管从湿筛倾析法筛出的丛枝菌根菌孢子中吸取单个孢子，用滤纸吸去孢子表面的水分后放置在胶液表面；

（4）把步骤（3）中放置孢子的载玻片平放在50℃烘箱中干燥12个小时；

（5）取出烘干的载玻片平放在操作台上，用吸管在凹圆载玻片的凹口外围涂上加拿大树胶，然后盖上盖玻片；涂胶液的范围掌握在凹口外围盖玻片能盖住的区域，胶液的用量掌握在盖上盖玻片后胶液不缺也不溢到凹穴内和盖玻片外缘；盖玻片的规格为：长宽22×22mm，或24×24mm，或24×32mm，厚度0.15mm～0.19mm；

（6）把上述制好的玻片标本平放在50℃烘箱中，经12个小时干燥，即制成整体孢子玻片标本。