[发明专利]具毒杀植物线虫活力的生防真菌Gloeotinia的制备方法

说明书

技术领域：

本发明属于微生物农药技术领域，具体涉及一种毒杀植物寄生线虫的真菌及其制备方法。

背景技术：

植物寄生线虫在世界上许多国家和地区发生和为害，种类多种多样。在全球范围内，植物寄生线虫的发生与危害随着农林业的发展和耕作栽培制度的变化日益严重，据Esser统计，到1990年为止全世界已报道发现植物寄生线虫207属4832种(刘维志，段玉玺.2000.植物病原线虫学.北京：中国农业出版社，p1-2)。据估计，植物寄生线虫造成世界主要农作物的年损失率为12.3％，超过1000亿美元，而实际的损失远远超过估计，理由是许多线虫造成的危害因没有刚间可见症状或专化性特征而未引起注意(Sasser，1986)，此外，世界范围内对线虫为害的新发现还在不断增加，而且一些更新的农业栽培体制使线虫问题更加突出，再者，线虫与其它生物相互作用而对植物产生的直接或间接影响还在急剧增加。在我国主要有根结线虫、大豆胞囊线虫、松材线虫、甘薯茎线虫等病原线虫造成严重危害，尤其根结线虫是世界农业上为害最大的一类病原线虫，病害发生后，一般减产10％左右，严重的高达75％以上，甚至绝收(Whitehead A.G.，1998.Plant Nematode Control.ISBN0851991882CAB International)。目前，植物寄生线虫的防治仍以化学防治为主，但近年来化学杀线剂的应用浪费大，污染环境，高毒高残留，破坏土壤生物区系等弊端日益为人们所重视(张克勤，何世川，周薇等.1991.真菌和细菌在线虫生防中的作用及其研究进展.杀虫微生物.3：55-66)，一些有效的化学杀线剂的应用陆续受到限制，因此对植物寄生线虫的生物防治研究自然成为热点问题。

早在60年代Olthof等在观察食线虫真菌Arthrobotrys oligospora Fres.捕食线虫的过程中提出了真菌产生杀线虫代谢物质的假说。1984年Thorn等发现高等担子菌Pleurotus spp.产生毒素毒杀线虫，1992年Kwork等证实该毒素为癸烯二酸，至今从高等真菌的次级代谢物中寻找杀线虫活性物质已成为新的研究热点。如大黄酚chrysophanol不仅是普遍的植物新陈代谢物而且也广泛存在灰绿曲霉(Aspergillus glaucus)、多孢木霉(Trichoderma polysporum)、鹿角毛壳菌(Chaetomium elatum)、豌豆深褐斑菌(Ascochyta pisi)和茎点霉属菌(Phoma spp.)中，大黄素emodin分布也广可从灰绿曲霉许多担子菌和地衣等真菌中获得，它们对根结线虫有微弱毒性。生物碱phenoxazone首先从血红密孔菌Pycnoporus sanguineus中获得，后来又从虎皮香杏菌Calocybe gambosa的发酵菌丝体中分离出对南方根结线虫M.incognita的ED50为50μg/ml。环缩肽白僵菌素beauvericin可从球孢白僵菌Beauveria bassiana、玫烟色拟青霉Paecilomyces fumosoroseus和镰刀属菌Fusarium spp.中分离得到，发现它对M.incognita有微弱活性。1997年，Mayer和Sterner等从奥尔类脐菇Omphalotus olearius的发酵液中分离到一高活性环十二缩肽物质omphalotin对根结线虫的ED50为0.75μg/ml，比商品杀线虫剂阿维菌素更具活性而且无抗菌性、不毒害植物，具有商业利用前景。

真菌产生的次生代谢产物具有丰富的结构多样性，因此真菌作为线虫的生防因子展现出巨大的发展前景。本发明正是基于上述理论，以植物寄生线虫为靶标，寻找具有高效杀线虫活性物质生防真菌，为进一步研究开发新型生物杀线虫剂寻找新的资源。

发明内容

本发明的目的是筛选获得对植物线虫具高杀虫活性的真菌菌株，将菌株按常规液体发酵培养后，从中获取具杀线虫活性的代谢产物，开发新的杀线虫生物农药，其中，所述的植物线虫是南方根结线虫Meloidogyne incognita，大豆胞囊线虫Heterodera glycines和水稻干尖线虫Aphelenchoides besseyi。