[发明专利]牡丹茎叶愈伤组织诱导方法

说明书

本申请为以下申请的分案申请：

申请号：200910083744.3；发明名称：牡丹愈伤组织诱导方法；申请日：2009.5.11。

技术领域

本发明涉及一种愈伤组织培养方法，尤其涉及一种牡丹茎叶愈伤组织诱导方法。

背景技术

牡丹为中国十大名花之一，也是中国的国花，有“花中之王”的美誉。牡丹组织培养主要是利用芽进行诱导植株和利用外植体通过愈伤组织途径进行诱导，而牡丹的愈伤组织诱导对于再生植株是一个重要的阶段，较高的愈伤组织诱导率对于后期愈伤组织的分化奠定良好的基础，如何获得较高的愈伤组织诱导率与培养基类型、激素的种类和浓度以及培养条件有密切的关系。

愈伤组织培养是一种最常见的培养形式，除茎尖分生组织培养和一部分器官培养以外，其他几种植物组织培养形式最终都要经历愈伤组织才能产生植株。此外愈伤组织还常常是悬浮培养的细胞和原生质体的来源。愈伤组织分为胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织，胚性愈伤组织是指体细胞胚的愈伤组织，经过分化成幼嫩的植株。

现有技术中，牡丹组织培养研究已经有较长的历史，研究内容也主要集中在外植体选择、生长调节物质配比和培养基配方等领域，主要是利用茎尖直接发育成植株，而利用外植体诱导愈伤组织，然后利用愈伤组织分化产生植株的研究相对较少，而愈伤组织的诱导是愈伤组织分化产生植株的前提条件。

上述现有技术至少存在以下缺点：

存在愈伤组织诱导困难、生根率和生根质量不高、驯化移栽困难、褐化、玻璃化等问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种愈伤组织诱导率高的牡丹茎叶愈伤组织诱导方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明的牡丹茎叶愈伤组织诱导方法，包括选取牡丹外植体，采用MS培养基进行愈伤组织的诱导，所述牡丹外植体包括茎，取材时期为：春季3月底4月初，取幼嫩的茎段或者由种子发芽形成的幼嫩的茎段；

茎的MS培养基包括：MS+NAA0.05mg/L+6-BA2.0mg/L+2，4-D1.0mg/L。

所述牡丹外植体还可以包括叶片，取材时期为：春季3月底4月初，取幼嫩的叶片或者由种子发芽形成的幼嫩的叶片；

叶片的MS培养基包括：MS+6-BA0.1mg/L+2，4-D0.5mg/L。

由上述本发明提供的技术方案可以看出，本发明所述的牡丹茎叶愈伤组织诱导方法，由于采用MS培养基进行牡丹茎叶愈伤组织的诱导，MS培养基中配有6-BA细胞分裂素、NAA植物生长调节剂、2，4-D除草剂等物质。选取适当时期的牡丹外植体和适当的培养基，愈伤组织诱导率高。

具体实施方式

本发明的牡丹茎叶愈伤组织诱导方法，其较佳的具体实施方式是，包括选取牡丹外植体，采用MS培养基进行愈伤组织的诱导，所述MS培养基中配有以下一种或多种物质：

6-BA细胞分裂素、NAA植物生长调节剂、2，4-D除草剂。

在进行愈伤组织的诱导前，可以先进行培养前处理：

首先，对所选取的牡丹外植体进行4℃低温处理；

然后，利用2％NaClO消毒30min，70％酒精消毒30s，无菌水冲洗3-5次。

具体实施例：

以不同的外植体为例，采用不同的培养基和不同的培养条件达到了最佳的诱导效果。下面以不同外植体为对象分别进行阐述：

胚愈伤组织的诱导：

培养时期：每年的9月份，种子形成后；

培养前处理：利用低温(4℃)处理和赤霉素处理相结合的方法，利用常规的消毒方法(2％NaClO消毒30min，70％酒精消毒30s，无菌水冲洗3-5次)消毒后接种；

最佳的培养基：MS+NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L；

愈伤组织诱导率达到100％。

茎段愈伤组织诱导：

取材时期：取幼嫩的茎段，春季3月底4月初，或者由种子发芽形成的幼嫩的茎段；

培养前处理：利用常规的灭菌方法(2％NaClO消毒30min，70％酒精消毒30s，无菌水冲洗3-5次)进行消毒；

最佳的培养基：MS+NAA0.05mg/L+6-BA2.0mg/L+2，4-D1.0mg/L；

愈伤组织诱导率80％以上。

叶片愈伤组织诱导：

取材时期：取幼嫩的叶片，春季3月底4月初，或者由种子发芽形成的幼嫩的叶片；

培养前处理：利用常规的灭菌方法(2％NaClO消毒30min，70％酒精消毒30s，无菌水冲洗3-5次)进行消毒；