[发明专利]鼠疫菌纤溶酶原激活因子Pla的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及鼠疫菌纤溶酶原激活因子Pla的单克隆抗体，同时涉及所述单克隆抗体的制备方法以及产生所述单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述单克隆抗体在检测Pla中的应用、以及含有所述单克隆抗体的胶体金免疫层析试纸条及其在检测鼠疫菌和/或辅助诊断鼠疫中的应用。

背景技术

鼠疫(Plague)是由耶尔森氏鼠疫杆菌(Yersinia pestis)引起的自然疫源性烈性传染病。鼠疫免疫检测是鼠疫防治工作中的一个重要环节，其在鼠疫的发现、疫区处理及临床诊断中发挥至关重要的作用。

传统的鼠疫免疫检测，主线是针对F1抗原。F1抗原是由耶尔森氏鼠疫杆菌pMTl质粒上cafl基因编码的一种荚膜蛋白。长期以来，F1抗原被认为是鼠疫杆菌的特异性抗原，基于F1的抗原、抗体检测方法被认为是较可信的鼠疫检测和诊断方法。然而，自然界已发现存在天然缺失F1抗原的鼠疫菌株，加之，F1抗原是一种温度调控表达抗原，在37℃时大量表达，而在28℃时不予表达或微量表达，这也限制了它的应用研究范围。发展除F1抗原外的检测和诊断技术较为必要，是鼠疫防治工作中的一个重要课题。

鼠疫菌纤溶酶原激活因子(Plasminogen activator，Pla)是鼠疫菌特有的pPCPl质粒编码的细胞表面蛋白酶，研究表明，鼠疫菌纤溶酶原激活因子Pla蛋白是鼠疫菌从皮下感染扩散到循环系统的重要毒力因子(Sodeinde OA，Subrahmanyam YV，Stark K，et a1.A surface protease and the invasive character of plague[J]Science，1992，258(6)：1004-1007；Goguen JD，Hoe NP，Subrahmanyam YVBK.Proteases and bacterial virulence：a view fromthe trenches[J].Infect Agents Dis，1995，4(1)：47-54)，在鼠疫菌致病过程中发挥重要作用。且Pla的转录、翻译不受温度限制。针对Pla蛋白进行检测，对于鼠疫菌的检测和/或辅助诊断鼠疫，特别是对于F1抗原缺失鼠疫菌株以及非37℃条件生长的鼠疫菌株(特别是鼠疫的传播媒介蚤的检测)具有重要意义。

目前对鼠疫菌Pla的检测主要是采用PCR技术，并取得了较好的检出效果。然而，该方法对技术操作要求比较高，且检测过程需要数小时，时间较长。

另一方面，单克隆抗体相较于多克隆抗体，具有特异性强、敏感性高的优点，可作为相关抗原的生物学功能研究的重要工具，用于Western blot、免疫沉淀、免疫细胞化学等实验，对于抗原的研究、相关疾病的检测、诊断、预后判断等具有重要意义。

但目前未见国内有关于鼠疫菌纤溶酶原激活因子Pla的单克隆抗体的报道。

发明内容

本发明的一个目的在于提供鼠疫菌纤溶酶原激活因子Pla的单克隆抗体，该单克隆抗体对鼠疫菌纤溶酶原激活因子Pla蛋白有特异性。

本发明的另一个目的在于提供产生所述单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明的另一个目的在于提供制备所述单克隆抗体的方法。

本发明的另一个目的在于提供所述单克隆抗体在检测Pla蛋白中的应用。

本发明的另一个目的在于提供一种检测Pla蛋白的胶体金免疫层析试纸条，它具有检测鼠疫菌和/或辅助诊断鼠疫作用。该胶体金免疫层析试纸条上含有本发明所述的单克隆抗体。

本发明应用杂交瘤技术制备了鼠疫菌纤溶酶原激活因子Pla的单克隆抗体。

首先，本发明的一个方面是提供了一种对鼠疫菌纤溶酶原激活因子Pla蛋白有特异性的单克隆抗体。本发明中所述的“抗体的特异性”是指单克隆抗体对相应抗原或近似抗原物质的识别能力。特异性高，识别抗原的能力就强。在本发明的一个具体实施方案中，本发明的单克隆抗体对GST(谷胱苷肽转移酶)-Pla融合蛋白、天然Pla蛋白有特异性，对谷胱苷肽转移酶没有特异性。在本发明的一个优选的具体实施方案中，所述的单克隆抗体是由保藏号为CCTCC NO.C201091或CCTCC NO.C201094的杂交瘤细胞株分泌产生。抗体类型分别属于IgG1和IgG2a。