[发明专利]耐受30g/l丁醇的突变菌株嗜酸小球及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株嗜酸小球菌Pediococcus acidilactici N-30耐高浓度丁醇的突变菌株Pediococcus acidilactici N-30。

背景技术

当今世界，由于石油等不可再生能源的不断减少，人们寻找可替代的能源越来越重要。生物质能源是最具有发展潜力的可替代能源之一，而丁醇被称为第二代生物质能源，在作为化工原料，具有广泛的用途，是最具有商业前景的产品，因此丁醇发酵自从上世纪60年代以来一直受到重视。

在clostridium.beijerinckiiNCIMB 8052发酵产丁醇后期，由于丁醇分子的极性性质，其与clostridium. beijerinckii NCIMB 8052的细胞膜相互作用，抑制了clostridium.beijerinckiiNCIMB 8052的跨膜运输系统及其酶活而导致细胞溶解，正由于丁醇的这种毒性严重抑制了发酵的顺利进行。因此导致发酵总溶剂量得不到提高，丁醇产量更是不足。因此筛选能够耐丁醇的菌株，然后利用转基因技术将此菌株的耐丁醇基因转到clostridium.beijerinckiiNCIMB 8052中，以提高其耐丁醇能力，从而提高产丁醇量，这是目前生物质能源丁醇的发展方向之一。

生物质能源具有很大的发展空间，但应尽量提高总溶剂的含量及丁醇含量。由于国际上专利的制约，在我们这方面的研究相对落后。目前，使发酵微生物能够耐受高浓度的丁醇，从而使发酵能够继续进行，最终提高丁醇的产量是该领域的研究热点。

发明内容

本发明的目的是提供一种嗜酸小球菌Pediococcus acidilactici耐受30g/l丁醇的突变菌株及其应用。

一种耐受30g/l丁醇的突变菌株，其分类命名为Pediococcus acidilacticiN-30，该菌株已于2010年8月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏登记号为CCTCC NO：M2010208。

该菌株可利用转基因技术将此菌株的耐丁醇基因转到clostridium.beijerinckiiNCIMB 8052中，以提高clostridium.beijerinckiiNCIMB 8052的耐丁醇能力，从而提高产丁醇量，这是目前生物质能源丁醇的热点方向。

上述菌株的制备方法如下：

（1）原始菌株活化：原始菌株：clostridium.beijerinckiiNCIMB 8052（购自英国国家工业和海洋细菌保藏中心）和Pediococcus acidilactici（购自美国国家菌种保藏中心ATCC）。将clostridium.beijerinckiiNCIMB 8052和Pediococcus acidilactici转接到38g/l的灭菌后的Difco 液体梭菌培养基上，于37℃恒温培养箱中培养，连续转接3次，pH值自然。

（2）原始菌株增殖培养基及增值培养: 将活化好的clostridium.beijerinckiiNCIMB 8052和Pediococcus acidilactici接到38g/l的液体Difco 梭菌培养基上，于37℃恒温培养箱中培养， pH值自然。

（3）接种前原始菌株培养：将100ml三角瓶的38g/l的Difco液体梭菌培养基用121℃的高压蒸汽灭菌20分钟后，过夜以除去液体中的氧气，然后将三角瓶中的液体培养基于无菌工作台中分装到15ml的高压蒸汽灭菌后的15ml青霉素瓶中，每瓶分装12ml，共3瓶。然后将clostridium.beijerinckiiNCIMB 8052和Pediococcus acidilactici接种在过夜的Difco液体梭菌培养基中，pH值自然，于37℃的恒温培养箱中培养，整个培养过程保持厌氧状态，待OD为1.06±0.05时，停止培养。