[发明专利]在过滤器上分离并且培养活细胞或者从它们之中提取遗传物质的装置和方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于在过滤器上分离和/或培养活细胞或者固定细胞的装置，从而进行所有的细胞分析（细胞学、免疫化学、FISH测试，等等）或者从在过滤器上分离的活细胞或者固定细胞中提取遗传物质，如果需要的话放大后提取遗传物质。本发明尤其适用于分离和/或培养在液体尤其是血液中存在的特殊细胞，或者从这些特殊细胞中提取遗传物质。

背景技术

特殊的血液细胞，例如肿瘤细胞或者滋养细胞，以非常小的比例存在并且在进行细胞学分析之前必须对其进行计数。

众所周知，要将基于甲醛的结合缓冲液加入到血液样品中以固定目标细胞，然后得到的液体通过多孔过滤器。该过滤器接着用于在实验室的显微镜下检查其上的目标细胞。然而，使用此过程是不可能得到活细胞的。

既然如此，发明者已经确定出获得活细胞将有可能在良好的条件下识别出特定的标记，以在诊断肿瘤或滋养细胞的遗传异常中应用分子生物学、细胞遗传学和FISH（“荧光原位杂交”的缩写）技术。

本发明的目的是通过以下手段来弥补这些缺点并满足这个要求：实现了在与标准实验室测试兼容的条件下收集活细胞，活细胞随后可以在适宜的生长因素中在适当的介质中培养。

本发明还涉及从在过滤器上分离的细胞中提取遗传物质，如果有必要的话放大后再提取，并且还涉及靶向治疗的敏感性和耐药性或者遗传异常的变异和基因表达水平的检测。

本发明尤其适用于对液体尤其是血液中存在的特殊细胞的DNA或RNA的收集和潜在的均匀放大。

例如从文献PCT/FR2006/000562中获知，基于甲醛的结合缓冲液被添加到血液样品中用以固定被寻求的目标细胞，并且得到的液体随后通过多孔过滤器。接着在实验室的显微镜下分析该过滤器以检测位于其上的细胞。接着可以在过滤器上抽样细胞进行分析，例如采用遗传分析。

然而，由于涉及工作时间、材料和精度，这个过程不能以合理的成本被大规模复制。既然如此，大规模的复制和降低的成本使分子生物学分析能够应用在肿瘤细胞和滋养细胞中。此外，使用甲醛固定细胞并不能获得质量良好的遗传材料：DNA被部分地降解并且与周围蛋白质之间形成桥梁，并且RNA的提取实际上也是不可能的。

发明内容

本发明的目的是通过以下手段弥补这些缺点并满足这个要求：实现了在与标准实验室试验相兼容的条件下所考虑的细胞中收集大部分条件良好的细胞物质，尤其是RNA和DNA。还应该注意到本发明可以使用有或没有甲醛的固定液来分离固定细胞。

为了这个目的，根据一个方面，本发明涉及一种用于分离位于过滤器上的固定或者活细胞的装置，特征在于其包括：

-隔室，其具有用于容纳携带所述细胞的液体的内部容积、下部开口以及空气入口；

-过滤器，其形成一个单一的单元，当液体通过过滤器时，至少暂时地通过所述隔室开口拦截所述细胞，

-针，其形成单一的防渗单元，至少暂时地，通过所述隔室开口，过滤器设置于针和隔室的内部容积之间，所述针被设计成刺穿相对于环境压力为负压的真空管的塞子以通过所述过滤器抽吸液体。

由于这些特征，该装置能够在过滤器上分离并收集感兴趣的固定后的活细胞，或者处于与它们的培养完美兼容的条件下的活细胞以便进行细胞学特性检测、以及细胞遗传学检测、用于其他任何细胞检测或者从细胞中提取遗传物质。

这种收集直接地在过滤器上进行几乎不会丢失所需的细胞。在这种方式中，在良好的条件下，以及与实验室中常规培养相兼容的条件下，可以以降低的成本收集考虑中的细胞的一大部分。分离后的细胞可以在培养前或培养后用于细胞或分子生物学测试。

构成本发明的装置还能以快速和高效的方式从特殊细胞中收集细胞物质，例如，在下面各阶段完成后：

-过滤阶段，在该阶段中液体的主要部分和所述其它细胞通过具有微孔的过滤器，微孔具有大小位于所述特殊细胞和其它细胞的直径之间的中间直径，

-细胞溶解阶段，不管后面是否有DNA和/或RNA在所述隔室中放大以及

-在过滤器上从溶解后的细胞中收集遗传物质的阶段。

构成本发明的装置具有多个优点：

1/过滤可以在支架上或者将装置握在一个人的手里进行，从而显著地节省了时间和材料（尤其，避免了使用真空泵以及适配器箱），

2/过滤可以在无菌罩中进行。

3/过滤可以在装置处于倾斜位置，甚至几乎水平时进行。

4/条件是完全标准化，取样管以具有预定真空量的标准化方式生产。