[发明专利]自浣熊分离犬细小病毒-2相关病毒

说明书

序列表 

本申请包括作为附随文本文件“PCT序列表_ST25.txt”的全部内容的序列表，所述序列表创建于2010年10月14日，含有18,268字节，其通过引用并入本文。

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发明背景

发明领域。

本发明总体上涉及针对犬细小病毒类似病毒(canine parvovirus-like virus)的改良疫苗。具体而言，本发明提供适于幼犬的疫苗，所述疫苗基于分离自浣熊的新型细小病毒。 

发明背景

犬细小病毒(CPV)主要是感染狗、尤其是幼年狗的肠道病原体。细小病毒在狗和大于4-5周龄的幼犬中的感染特征为急性腹泻、发热和白细胞减少症；在更小的幼犬中的感染特征为心肌病。在未接种疫苗的狗中，该病的死亡率极高。尽管可得到针对CPV的疫苗，但因为CPV是单链DNA病毒并具有极强的变异能力，所以该病毒显示出改变其抗原性的显著的能力(Parrish和Kawaoka 2005)，从而逃避由疫苗所提供的免疫保护。因此，持续监测流行病毒的抗原型和基因型并相应地调整疫苗组分很有必要。

新生幼犬通过其母亲哺乳来获得抵抗疾病例如CPV感染的免疫力，尤其是在生下来后的头两天。哺乳的幼犬摄入最早产生的乳汁即初乳，初乳中的抗体传给幼犬。对于狗以及很多其它哺乳动物，初乳所给予的免疫力在大约第五周龄时失去其影响。 

给幼犬接种疫苗时的一个特殊挑战是根据提供保护的时间范围给予疫苗，此时间范围要与母体抗体提供保护的时间重叠并要始于母体抗体衰弱。当前，幼犬的疫苗方案通常从约6周龄开始，此后约每3周加强免疫(booster)一次，例如在9、12和15周。然而，为使本方案提供充分保护，首次疫苗剂量必须能立刻引起保护性免疫应答。由于幼犬免疫系统的不成熟和产生免疫应答必需的时间周期，这完全是不切实际的。充分保护通常要直到给予整个疫苗接种过程后才能发挥。CPV导致的基于年龄的死亡率示于图1，其显示CPV导致的最大死亡率发生在疫苗方案完成之前。 

简单的答案可能是在甚至更早例如在2-3周时开始疫苗接种程序。然而，这将是无效的，因为对于幼犬，其母亲已经接种过疫苗或以其它方式暴露于具有相同抗原决定簇的病毒株，传给幼犬的母体抗体将会中和疫苗中的病毒，从而阻止幼犬自身免疫系统对病毒的应答。 

兽医学中另一个挑战是癌症的治疗，例如狗的癌症治疗。用于癌症治疗现有工具有很多局限，尤其是对老年狗。给予溶瘤细小病毒来杀死癌细胞，作为有效的癌症治疗显示巨大前景(Rommelaere等，Cytokine & Growth Factor Reviews 21:185-195, 2010；和Rommelaere等的美国专利号7,179,456，其全部内容通过引用并入本文)，并可能应用于犬类。然而，针对细小病毒的已有抗体的存在(例如由于接种疫苗)将致使这种方法失效，因为细小病毒会被既有抗体中和。另外，目前很少进行狗的基因治疗，但如果确定了合适的核酸载体，这将是用于治疗数种病症的有前景的方法。 

迄今为止，现有技术无法提供对这些问题的解决方法。 

发明概述 

本发明基于新型细小病毒(分离自美国的浣熊)的发现。核苷酸和氨基酸序列分析表明，所述病毒代表犬细小病毒2型(CPV-2)的一个独特变异株。这种命名为“AR08071304”(本文也称为浣熊细小病毒、“RPV”、“08071304”和“细小病毒-2 (浣熊)”等)的新型CPV-2可用作针对犬细小病毒的疫苗的组分。具体而言，所述变异株可用作针对非常幼小的狗(例如仍处于哺乳期或正在断奶过程中的幼犬)的疫苗组分，因此解决了如何提供适当的幼犬疫苗方案的问题。该浣熊细小病毒不会被狗中既有犬细小病毒-2抗体完全中和。另外，由于受体或宿主生物例如狗中已有抗体中和作用的缺失，该浣熊细小病毒可用作基因治疗的溶瘤剂和载体(vector)(载体(carrier)、溶媒)。