[发明专利]一种温度敏感的猪肺炎支原体疫苗株及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及猪肺炎支原体株，含有该株的疫苗，以及该疫苗在保护猪免患支原体肺炎中的应用。

背景技术

猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)是引起猪支原体肺炎(也称为地方性肺炎(EP))的病源因素。这是在全球范围内最为常见，具有经济显著性并且影响到猪生产的呼吸性疾病之一。这种疾病通常会伴随着继发性感染，高发病率，低死亡率以及低饲料转化率，这种疾病所造成的全球经济损失估计为约每年十亿美元。

在地方性肺炎中，猪肺炎支原体细菌粘附到猪肺部上皮细胞的纤毛上，摧毁健康的正常纤毛，同时造成机会性生物进入呼吸道组织中从而引起疾病。一旦造成，猪肺炎支原体会引起猪肺部损伤。

这种疾病具有高传染性，其传播通常是由直接接触感染的呼吸道分泌物所造成，例如打喷嚏或者咳嗽时由口鼻部或嘴喷出的液滴。

目前已经研制出一些抗猪肺炎支原体的疫苗，其中大多数疫苗由约十个公司的22个被注册为单价或二价/多价的疫苗商标所提供。所有的疫苗都是灭活或者失活的猪肺炎支原体制剂。

全细胞失活的猪肺炎支原体疫苗的实例包括：RESPISURE^TM和STELLAMUNE^TM(辉瑞)，SUVAXYN M.HYO^TM(富道)，HYORESP^TM(梅里亚)，M+PAC^TM(先灵葆雅)，以及PORCILIS^TM(英特威)。

虽然一些疫苗能够减弱EP的严重性，但没有任何一种全细胞灭活或者失活的疫苗能够完全免除猪肺炎支原体的感染，因此，制备更加高效的疫苗正是当务之急。

本发明优选实施方式的目的在于提供适用于接种的活猪肺炎支原体株来抑制地方性肺炎。

本说明书中引用的全部参考文献，包括任何专利或专利申请，在此一并纳入作为参考。在此明确表示：尽管本文引用了一些现有技术的公开文件，但这些参考文件并不构成对这些文件中的任何内容都构成本领域的部分公知常识的认可。

发明内容

本发明大体上提供了一种活的减毒(live attenuated)猪肺炎支原体株，该株能够用来生产有效地保护猪免患地方性肺炎的活疫苗。

第一方面，提供了一种减毒的猪肺炎支原体株，这种减毒的猪肺炎支原体株含有在至少一个表1中列出的基因上的突变。

在一种实施方式中，疫苗株含有在表1中列出的全部基因上的突变。

在一种实施方式中，疫苗株是温度敏感的。

减毒疫苗通常具有很多优越性，因为他们携带着天然状态下的所有感染剂(infectious agent)的免疫原决定簇并将其带入宿主的免疫系统中，并且由于该试剂在疫苗宿主体内能够增殖，使得免疫剂的使用量相对少。减毒的方法包括：将毒性株传代数次或者暴露于放射线或化学药物。可以猜想到，这些方式会向基因组中引入突变，造成微生物毒性降低但是仍可复制。

这些方式的缺陷在于，引入的突变是随机性的，无法在分子水平上表征。筛选减毒的方法，例如伴随温度敏感的筛选，也是非常耗时的，而且会得到错误的结果，因为温度敏感的疫苗株可能未减毒，而减毒株不需要是温度敏感的。这个过程需要不断地尝试和错误。另外，减毒株也可能进一步突变，转化为剧毒的。

为了提供抗猪肺炎支原体的活疫苗，发明人用利用化学突变法得到的猪肺炎支原体进行试验，并筛选温度敏感的克隆体。发明人冻干了活的突变体细菌，发现一周之后该细菌能够恢复活性并且连续传代后仍保持活力。这适于用作抗猪肺炎支原体的疫苗株。对疫苗株和原株(master strain)进行测序并比较疫苗株中突变的、序列确认的基因，从而满足减毒株在基因水平上的表征。

第二方面，提供一种减毒的猪肺炎支原体疫苗株，该疫苗株是温度敏感和减毒的，已经被保藏于国家计量研究院(澳大利亚)，保藏号为NM04/41259。

第二方面所述的疫苗株已显示出具有保护性免疫，并且显示出不会因为连续传代而转化为剧毒的(数据没有示出)。

第三方面包括制备第一方面或第二方面的疫苗株的方法，该方法包括使用合适的猪肺炎支原体起始分离株(starting isolate)进行化学突变，以及筛选出在连续传代后仍保持活力的突变体。

在一种实施方式中，基于温度敏感性对突变体进行第一次筛选。