[发明专利]来自普通章鱼的DFP酶

说明书

涉及序列表

本申请包含计算机可读形式的序列表。该计算机可读形式的序列表通过提述并入本文。

涉及生物材料的保藏

本申请包含对于生物材料保藏的提及，所述保藏通过提述并入本文。关于完整的信息，参见说明书最后一段。

技术领域

本发明涉及具有有机磷水解酶活性的分离的多肽和编码所述多肽的分离的多核苷酸。本发明还涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及产生和使用所述多肽的方法。

背景技术

本领域已知有机磷化合物。具体而言，已知一些战争药剂(warfare agent)为有机磷化合物如沙林(Sarin)、环沙林(Cyclosarin)和梭曼/索曼(Soman)。其他有机磷化合物作为农药为人所知。

需要能够使被上述有机磷化合物污染的区域去污染。已提出将具有有机磷水解酶活性如二异丙基氟磷酸酶(diisopropylfluorophosphatase)活性的多肽用于此目的，因为此种多肽能够水解有害的有机磷化合物并由此将其转化为有害性较低的产物。

在WO99/43791中，公开了来自鱿鱼(Loligo Vulgaris)的二异丙基氟磷酸酶，且亦描述了其用于去污染的潜在用途以及其他应用。

本发明的目标是提供具有有机磷水解酶例如二异丙基氟磷酸酶活性的多肽和编码所述多肽的多核苷酸，特别是具有高稳定性和/或高比活性的。

发明概述

本发明涉及具有有机磷水解酶活性的分离的多肽，所述多肽选自下组：

(a)包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：2的成熟多肽具有至少75％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，最优选至少90％，和甚至最优选至少95％的同一性；

(b)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸在至少中-高严格条件下与以下杂交：(i)SEQ ID NO：1的成熟多肽编码序列，(ii)包含SEQ ID NO：1的成熟多肽编码序列的DNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全长互补链；

(c)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸包含与SEQ ID NO：1的成熟多肽编码序列具有至少65％，更优选至少70％，更优选至少75％，更优选至少80％，更优选至少85％，更优选至少90％，更优选至少95％，更优选至少96％，甚至更优选至少97％，最优选至少98％，且甚至最优选99％同一性的核苷酸序列；

(d)SEQ ID NO：2的成熟多肽的包含取代、缺失和/或插入一个或多个(几个)氨基酸的变体。

本发明还涉及编码具有有机磷水解酶活性的多肽的分离的多核苷酸，所述多核苷酸选自下组：

(a)编码包含氨基酸序列的多肽的多核苷酸，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：2的成熟多肽具有至少75％同一性；

(b)多核苷酸，其在至少中严格条件下与以下杂交：(i)SEQ ID NO：1的成熟多肽编码序列，(ii)包含SEQ ID NO：1的成熟多肽编码序列的DNA序列，或(iii)(i)或(ii)的互补链；

(c)多核苷酸，其包含与SEQ ID NO：1的成熟多肽编码序列具有至少65％同一性的核苷酸序列；和

(d)多核苷酸，其编码SEQ ID NO：2的成熟多肽的包含取代、缺失和/或插入一个或多个(几个)氨基酸的变体。

本发明还涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、重组表达载体、重组宿主细胞，和产生具有有机磷水解酶活性的多肽的方法

本发明还涉及去污染的方法，例如，通过降解有机磷化合物。

具体而言，本发明涉及通过将本发明的有机磷水解酶施于经一种或多种有害的或不希望的有机磷化合物污染的区域或装置来对所述区域或装置去污染的方法。

本发明还涉及包含编码此种具有有机磷水解酶活性的多肽的分离的多核苷酸的植物。

本发明还涉及产生此种具有有机磷水解酶活性的多肽的方法，包括：(a)在有助于产生该多肽的条件下培养包含编码此种具有有机磷水解酶活性的多肽的多核苷酸的转基因植物或植物细胞；和(b)回收所述多肽。

附图简述

图1显示了NN059107的构建图(restruction map)。

定义：