[发明专利]巨大芽孢杆菌菌株DSM90相关的α-淀粉酶及其使用方法

说明书

优先权

本申请要求2009年3月10日递交的美国临时专利申请系列号61/158,950的优先权，所述文献在此通过引用方式完整地并入作为参考。

技术领域

公开了涉及从巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)菌株DSM90获得的α-淀粉酶和涉及结构上相关淀粉酶的组合物和方法。

发明背景

淀粉由直链淀粉(15-30％w/w)和支链淀粉(70-85％w/w)的混合物组成。直链淀粉由α-1，4-连接的葡萄糖单元的直链组成，具有从约60,000至约800,000的分子量(MW)。支链淀粉是每隔24-30个葡萄糖单元含有α-1，6分支点的分支聚合物，其分子量可高达1亿。

来自淀粉的浓缩葡萄糖浆形式的糖目前通过酶催化方法产生，该方法包括(1)用α-淀粉酶将固体淀粉液化(或粘性降低)成具有约7-10平均聚合度的糊精，和(2)用淀粉葡糖苷酶(又称葡糖淀粉酶或GA)糖化所得的液化淀粉(即淀粉水解物)。所得的糖浆具有高的葡萄糖含量。商业产生的许多葡萄糖浆随后被酶促异构化成称作异糖浆(isosyrup)的葡萄糖/果糖混合物。

α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)通过随机切割内部的α-1，4-糖苷键来水解淀粉、糖原和相关的多糖。α-淀粉酶，特别地来自芽孢杆菌属(Bacilli)的α-淀粉酶，已经用于多种不同目的，包括淀粉液化、织物退浆、造纸和纸浆工业中的淀粉改性，和用于酿造。这些酶也可以用来在餐具洗涤和衣物洗涤期间除去淀粉性污渍。对具有优异清洁性能的α-淀粉酶存在需求。

发明概述

本发明的组合物和方法涉及来自巨大芽孢杆菌菌株DSM90的α-淀粉酶和相关的α-淀粉酶，它们代表用于工业应用的独特淀粉酶家族。这些淀粉酶总体地称作AmyDSM90相关多肽或AmyDSM90相关淀粉酶。

在一个方面，提供了与AmyDSM90(SEQ ID NO：1)具有至少80％氨基酸序列同一性的分离多肽，其中该多肽相对于SEQ ID NO：1具有至少一个以下特征：

a)在第21位置处的天冬氨酸，

b)在第97位置处的天冬酰胺，和

c)在第128位置处的异亮氨酸。

在一些实施方案中，该多肽具有第21位置处的天冬氨酸和在第97位置处的天冬酰胺。在一些实施方案中，该多肽具有第21位置处的天冬氨酸和在第128位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，该多肽具有第97位置处的天冬酰胺和在第128位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，该多肽具有第21位置处的天冬氨酸、在第97位置处的天冬酰胺和在第128位置处的异亮氨酸。

在一些实施方案中，该多肽由异源细胞表达为分泌性多肽。

在一些实施方案中，该多肽具有α-淀粉酶活性。

在一些实施方案中，该多肽与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性。在一些实施方案中，该多肽与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少95％同一性。在一些实施方案中，该多肽具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列。在一些实施方案中，该多肽具有SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29或SEQ ID NO：30的氨基酸序列。

在一个相关的方面，提供了分离的多肽，其具有SEQ ID NO：23、SEQID NO：24、SEQ ID NO：25或SEQ ID NO：26的氨基酸序列。

在又一方面，提供了包含任一种前述多肽的组合物。

在一些实施方案中，该组合物是清洁组合物。在一些实施方案中，该组合物有效用于从衣物除去淀粉性污渍。在一些实施方案中，该组合物有效用于从餐具除去淀粉性污渍。在一些实施方案中，该组合物有效用于从织物除去淀粉性污渍。

在一个相关方面，提供了组合物，其包含具有SEQ ID NO：1、SEQ IDNO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：28、SEQID NO：29或SEQ ID NO：30的氨基酸序列的多肽。

在一些实施方案中，该组合物是清洁组合物。在一些实施方案中，该组合物有效用于从衣物除去淀粉性污渍。在一些实施方案中，该组合物有效用于从餐具除去淀粉性污渍。在一些实施方案中，该组合物有效用于从织物除去淀粉性污渍。

在另一个方面，提供了用于从表面除去淀粉性污渍的方法，该方法包括