[发明专利]通过不同的翻译后修饰改变和调节蛋白质活性无效
| 申请号: | 201080008795.0 | 申请日: | 2010-02-26 |
| 公开(公告)号: | CN102317309A | 公开(公告)日: | 2012-01-11 |
| 发明(设计)人: | D·N·汤普森;D·W·瑞德;V·S·汤普森;J·A·莱西;W·A·阿佩尔 | 申请(专利权)人: | 巴特勒能源同盟有限公司 |
| 主分类号: | C07K14/195 | 分类号: | C07K14/195;C12P21/02 |
| 代理公司: | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人: | 余颖 |
| 地址: | 美国爱*** | 国省代码: | 美国;US |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 通过 不同 翻译 修饰 改变 调节 蛋白质 活性 | ||
1.一种分离的和/或纯化的糖基化蛋白,其中所述糖基化蛋白包括SEQ ID NO:307。
2.一种改变极端酶的酶活性的方法,所述方法包括:
使所述极端酶与能够使所述极端酶糖基化的分离的和/或纯化的酶或化学体系进行流体接触;以及
使所述极端酶糖基化。
3.根据权利要求2所述的方法,其中从生物中分离和/或纯化能够使所述极端酶糖基化的所述分离的和/或纯化的酶。
4.根据权利要求3、9、10、13、18和22任一项所述的方法,其中所述生物选自酸热脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus acidocaldarius)和毕赤酵母(Pichia pastoris)。
5.根据权利要求2、9和10任一项所述的方法,其中所述极端酶为嗜热嗜酸菌的极端酶。
6.根据权利要求2、9和10任一项所述的方法,其中所述极端酶选自SEQ ID NOS:307、337和338。
7.根据权利要求2、9和10任一项所述的方法,其中与非糖基化形式的极端酶相比,所述极端酶具有改变的纤维素酶、木聚糖酶或β-木糖苷酶活性。
8.根据权利要求2、9和10任一项所述的方法,其中在选自低于约5、约3.5和约2的pH下,或在选自低于约90℃、约80℃、约70℃、约60℃和约50℃的温度下,与非糖基化形式的极端酶相比,所述糖基化极端酶具有改变的纤维素酶、木聚糖酶或β-木糖苷酶活性。
9.一种改变极端酶的酶活性的方法,所述方法包括:
使所述极端酶与能够使所述极端酶糖基化的生物细胞提取物进行流体接触;以及
使所述极端酶糖基化。
10.一种改变极端酶的酶活性的方法,所述方法包括:
为能够表达所述极端酶并使所述极端酶糖基化的生物提供编码所述极端酶的核酸;以及
由所述生物产生糖基化形式的极端酶。
11.根据权利要求10和22任一项所述的方法,其中所述编码蛋白质的核酸进一步包含分泌信号。
12.一种通过根据权利要求2、9和10任一项所述的方法产生的分离的和/或纯化的极端酶。
13.一种翻译后修饰目标蛋白质的方法,所述方法包括:
使目标蛋白质与从能够使所述目标蛋白质糖基化的生物分离的糖基转移酶进行流体接触。
14.根据权利要求13所述的方法,其中所述糖基转移酶选自SEQID NOS:1、18、35、52、69、86、103、120、137、154、171、188、205、222、239、256、273、290的糖基转移酶。
15.根据权利要求13所述的方法,其中所述目标蛋白质为极端酶。
16.根据权利要求15所述的方法,其中所述极端酶选自SEQ ID NOS:307、331、333、335、337和338。
17.根据权利要求13、18和22任一项所述的方法,其中所述翻译后修饰包括糖基化。
18.一种翻译后修饰目标蛋白质的方法,所述方法包括:使目标蛋白质与嗜热嗜酸生物的细胞提取物进行流体接触。
19.根据权利要求18和22任一项所述的方法,其中所述嗜热嗜酸生物为酸热脂环酸芽孢杆菌。
20.根据权利要求18所述的方法,其中所述目标蛋白质为嗜热嗜酸菌的酶。
21.根据权利要求18和22任一项所述的方法,其中所述目标蛋白质选自SEQ ID NOS:307、331、333、335、337和338。
22.一种使目标蛋白质糖基化的方法,所述方法包括:
为嗜热嗜酸生物提供编码所述目标蛋白质的核酸;以及
在所述嗜热嗜酸生物中产生所述目标蛋白质。
23.根据权利要求22所述的方法,其中所述目标蛋白质为嗜热嗜酸菌的内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶。
24.一种通过根据权利要求13、18和22所述的方法的任意一种产生的分离的和/或纯化的蛋白质。
25.一种分离的和/或纯化的糖基化蛋白,其中所述蛋白选自SEQ ID NOS:307、331、333、335、337和338。
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