[实用新型]一种检测水产中孔雀石绿的免疫胶体金试剂板

说明书

技术领域

本实用新型属于水产中药物残留检测技术领域，具体涉及一种检测水产中孔雀石绿的免疫胶体金试剂板。

背景技术

孔雀石绿(MG)是一种三苯甲烷类染料，由苯甲醛和N，N-二甲基苯胺在盐酸或硫酸中缩合生成四甲基代二氨基三苯甲烷的隐性碱体后，在酸介质中被二氧化铅秘氧化制得。因其氯化电位势与组成酶的某些氨基酸相近，从而通过竞争作用阻碍蛋白肽的形成，可用作抗菌杀虫药。

孔雀石绿曾被广泛用于预防与治疗各类水产动物的水霉病、鳃霉病和小瓜虫病等。然而孔雀石绿具有高毒素、高残留、高致癌和高致畸性。孔雀石绿进入人类或动物机体后，可以通过生物转化，还原代谢成脂溶性的隐性孔雀石绿，毒性高于孔雀石绿，严重威胁人类身体健康。同时，孔雀石绿的残留还严重影响了我国水产品的对外出口，给我国水产品出口贸易带来了巨大壁垒。

欧盟、美国已宣布禁止其在经济鱼类(观赏鱼除外)养殖过程中使用。2002年12月农业部发布第235号公告《动物性食品中兽药残留最高限量》将孔雀石绿列为禁止使用药物，在动物性食品中不得检出。

目前，水产中孔雀石绿残留常用的检测方法主要有仪器法和免疫分析法。仪器法有高效液相色谱法(HPLC)、液-质联用(LC-MS)、气-质联用法、薄层色谱法、普通分光光度法等。2005年9月我国质检总局、国家标准委共同发布实施了GB/T 19857-2005《水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》国家标准，要求孔雀石绿及其代谢物在水产中的检出率不得超过1克/1000吨(1ppb)。该标准规定了水产品中孔雀石绿及其代谢物隐性孔雀石绿、结晶紫及其代谢物隐性结晶紫残留量的液相色谱-串联质谱和高效液相色谱的测定方法，液相色谱-串联质谱法检测限为0.5ppb，高效液相色谱法检测限为2ppb。仪器法特异性好、准确率高，但由于对设备、环境、操作技能等存在一定的要求，检测周期长，不利于大规模样本筛选。免疫分析法有酶联免疫吸附法(ELISA)胶体金免疫层析法(GICA)。酶联免疫吸附法检测量大，操作相对简单，但是该法同样需要实验室设备辅助，分析时间较长，具有一定局限性。

胶体金免疫层析法(GICA)是80年代继三大标记技术(荧光素、放射性同位素和酶)后发展起来的固相标记免疫测定技术。应用层析式抗体免疫竞争原理，特异性检测样品中的有毒有害物质残留，灵敏度高，成本低，操作简便快速，无需特殊设备辅助。

国内外市场上提供检测水产中孔雀石绿药物残留的ELISA产品应用较广，灵敏度多在0.5-2ppb。而操作更简便，成本更低的GICA产品市场认知度较低，灵敏度为2ppb，远不能满足当前检测需求。因此，研制开发一种检测限符合要求，重现性好，检测时间短，适合现场快速检测，技术产品或仪器设备成本较低，运行费用低的快速检测试剂势在必行。

实用新型内容

本实用新型的目的在于针对现有检测技术的不足，提供一种灵敏度高、特异性强、操作简便快捷、不需要特殊仪器设备辅助、生产成本低的孔雀石绿免疫胶体金快速检测试剂板。

本实用新型试剂板由塑料模板上下板、背衬及粘附在背衬上依次紧密相连的样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫组成。其中样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫相邻各部分间有1-2mm的重叠，其目的一方面是保证层析作用从样品垫到吸水垫部位顺利进行，另一方面是为了使样品溶液与样品垫有充分反应时间，样品垫上的缓冲体系可以中和样品溶液的酸碱度，保证样品溶液中的有效成分与胶体金结合垫上的金标抗体顺利发生反应。

胶体金结合垫上包被有抗孔雀石绿单克隆抗体与胶体金的结合物；硝酸纤维素膜上从样品垫到吸水垫方向依次包被有孔雀石绿-载体蛋白偶联物和羊抗鼠IgG，分别作为检测线和质控线。偶联孔雀石绿的载体蛋白可为牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)或者血蓝蛋白(KLH)。

本实用新型所描述的试剂板的各部分组成成分与功能如下：

塑料模板，起固定试纸条及标示功能区(加样孔、检测区、控制区)的作用

背衬为一面涂有不干胶的不吸水的韧性材料，如PVC板，起固定支持试纸其他组成部分的作用。

样品垫由玻璃纤维制成，起吸收样品溶液与缓冲样品溶液pH值的作用。

胶体金结合垫由聚酯膜制成，其上标记有抗孔雀石绿单克隆抗体与胶体金的结合物，是样品溶液中的有效成分与金标抗体发生反应的场所。

硝酸纤维素膜部分主要作用是将反应结果以肉眼可见的颜色表征出来。

吸水垫为滤纸，作为吸水部分其作用是将移动上来的多余的溶液吸收。

本实用新型试剂板具有如下有益效果：