[实用新型]猪的胰蛋白酶(TRY)ELISA检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于检测猪胰蛋白酶的试剂盒。

背景技术

酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)是将抗原、抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来的一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法，可敏感地检测体液中微量的特异性蛋白。

猪胰蛋白酶是猪胰腺分泌的一种水解酶。能水解由肽链相连的氨基酸类化合物，具有酯酶活性。正常猪血清中含量甚微。人和猪的急性胰腺炎的发病机理都是由于胰腺因胰蛋白酶的自身消化作用，对其周围组织的消化，从而继发一系列的器官的功能障碍。在正常情况下，胰液内的胰蛋白酶原无活性，待其流入十二指肠，受到胆汁和肠液中的肠激酶的激活作用后乃变为有活性的胰蛋白酶，方具有消化蛋白质的作用。通过对实验模型猪的观察，大多数患急性胰腺炎的猪胰蛋白酶明显增高，因此测定猪血清胰蛋白酶对诊断猪急性胰腺炎有重要意义。目前，对于胰蛋白酶的检测主要是测定其活性，方法主要有放射免疫分析法(RIA)和以苯甲酰-L-精氨酸乙酯(简称BAEE)，对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯(简称TAME)，苯甲酰-L-精氨酸-对硝基苯胺(简称BAPA)和苯甲酰-L-精氨酸-β-萘酰胺(简称BANA)等为底物，用紫外吸收法测定的方法。RIA技术极其敏感而又极其特异，但其却需要具备尖端复杂的设备，且成本也不低。同时，RIA还需要特殊的预防措施，因为其要用到放射性物质。因此，如今RIA在很大程度上已经被ELISA所取代。采用BAEE、TAME等为底物，用紫外吸收法测定的方法，由于血清中还有其他蛋白酶也能水解试剂中的底物，同时还有蛋白酶的抑制物存在，这些都会影响测定结果，并且由于实验操作繁琐，不能定量，其应用意义不大。因此，有必要选用一种快速、简便能够定量且灵敏度、准确度和特异性高的方法来进行胰蛋白酶的检测。

实用新型内容

本实用新型要解决的技术问题是：提供一种检测猪胰蛋白酶的ELISA试剂盒，其操作简便，成本低，稳定性好，适合于血液及其它生物液体中胰蛋白酶的检测。

为了解决上述技术问题，本实用新型所采用的技术方案是：一种猪的胰蛋白酶(TRY)ELISA检测试剂盒，包括酶标板，所述酶标板包括固相载体和包被层，固相载体上设置有多个微孔，包被层附着在固相载体的微孔表面，包被层是由小鼠抗猪胰蛋白酶单克隆抗体和牛血清白蛋白依次涂布在微孔上形成的复合层。

本实用新型采用ELISA方法的试剂盒可以定量检测血液或其它生物液体中胰蛋白酶含量，显著提高了胰蛋白酶检测结果的准确度；并且灵敏度高，即使少量或痕量酶也能够检测出；特异性高，几乎不受体液中其他物质，如酶抑制利、激活剂等的影响，不受药物的干扰，且操作简单，省时省力，特别适用于胰蛋白酶的检测。

附图说明

图1为本实用新型一具体实施例酶标板结构示意图。

1固相载体，2微孔，3包被层。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本实用新型作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本实用新型并能予以实施，但所举实施例不作为对本实用新型的限定。

如图1所示，本实用新型试剂盒的酶标板，其包括固相载体1和包被层3，固相载体1采用96孔聚苯乙烯试剂板(PS)。固相载体1上有多个微孔2，包被层3附着在固相载体上的微孔2上。包被层3是包括小鼠抗猪胰蛋白酶单克隆抗体和牛血清白蛋白的复合层。

该具体实施例的试剂盒制备方法是：采用96孔聚苯乙烯试剂板(PS)作为固相载体，先将其置于紫外光下辐照2小时，使PS板活化。在试剂板微孔条上先包被一定浓度的小鼠抗猪胰蛋白酶单克隆抗体，4℃过夜，经洗板及牛血清白蛋白封闭处理后制成包被好的酶标板，以备标本检测。依次以生物素化兔抗猪胰蛋白酶多克隆抗体，亲和素化辣根过氧化物酶(HRP)作为检测试剂A及B，以3，3′，5，5′-四甲基联苯胺(TMB)及硫酸分别作为底物及终止液。

经实验表明，本实用新型所用ELISA方法在检测猪血清及其它生物液体标本时其检测范围为1.56-100ng/ml，试剂盒一系列的质量指标检测结果如下：

1.灵敏度：本试剂盒最低检测限为0.5ng/ml，而使用RIA法最低检测限则为15ng/ml，极大地提高了灵敏度。

2.回收率：将三份不同定量的胰蛋白酶标准品分别添加到血清和十二指肠液中，计算回收率。(如表)