[发明专利]一种便捷观察烟株茎尖花芽分化的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种便捷观察烟株茎尖花芽分化的方法，属植物发育生物学技术领域。

背景技术：

花芽分化是植物从营养生长转向生殖生长的标志。烤烟花芽分化起始的早晚，不仅影响到烟株的有效叶片数和烟叶产量，而且会对烟叶品质产生重大影响。陈瑞泰^[1]、岳彩鹏^[2]用石蜡切片法研究报道了花芽分化过程茎端组织的形态变化，刘秀丽^[3]等用扫描电镜法研究了花芽发育的过程及特点，并对花序建成与叶型的关系进行了分析。但石蜡切片法操作繁锁、扫描电镜法成本较高。

经文献检索，未见与本发明相同的公开报道。

参考文献：

1、中国烟草栽培学[M].上海：上海科技出版社，1987年出版P67-71

2、低温对烤烟生长发育的影响及其调控研究[D].郑州：河南农业大学博士论文，2002年.P28

3、烟草花芽分化的形态建成观察[J].中国烟草科学，2003(1)：9-11

发明内容：

本发明的目的克服现有技术之不足，而是提供一种简便、快速、有效的观察烟株茎尖花芽分化的方法。

本发明采用体视显微镜法对烟株茎尖花芽分化进行观察，方法包括取样、样品组织的处理、样品的固定及样品的观察工序，具体步骤如下：

a.自茎尖向下5公分，用刀片切取样；

b.取样后立即将茎尖置于普通15mL以上医用注射器中，将推杆推至底部，以拇指堵紧针管前部，用力拉起推杆至顶部，持续1～3分钟，重复3～4次；

c.将茎尖样品放入配比为：38％甲醛5.0mL、醋酸5.0mL、75％乙醇90.0mL的固定液(FAA)中固定24小时待检；

d.采用体视显微镜对样品进行观察：将茎尖从固定液中取出，在茎基部插上一根细针，细针的另一端插在长、宽、高为5cm×5cm×1cm的塑料泡沫上，再把塑料泡沫放在体视显微镜的载物台上，移动塑料泡沫和旋转细针，从目镜中观察到茎尖为止；用解剖针轻轻剥开茎尖，调节焦距及放大旋钮，使视野中的图象清晰后进行拍照，得到烟株茎尖花芽分化过程的体视显微照片。

本发明与现有的技术相比具有如下的优点：

1、采用普通医用注射器除去茎尖组织内的气体，操作简便、成本低，在田间即可完成；

2、将茎尖用细针支撑后，再插到塑料泡沫上，通过移动塑料泡沫和旋转细针来调节所要观察的组织，不伤茎尖样品；

3、用体视显微镜观察代替电子显微镜和石蜡切片法观察，简化了样品制备的过程，不仅能准确地记录花芽分化的各个状态的阶段性特征，还保留了茎尖周围的幼叶，幼叶的存在为茎端提供了较好的辅助定位，使茎尖在空间上的部位特征更为突出；是一种简便、快速、有效的观察烟株花芽分化进程的方法，对试验研究具有重要的指导意义。

附图说明：

图1为烤烟花芽分化过程的体视显微观察图(×50)。图中：A显示处于营养生长状态的顶芽、B显示生殖生长初期的顶芽、C显示顶花原基分化期、D显示花萼原基分化期、E显示花瓣、雄蕊原基分化期、F显示雌蕊原基分化期。

图2为体视显微镜观察图与已报道的电镜图片的比较图。图中：小写字母为电镜图片、大写字母为体视显微镜镜检图片、(a，A)显示处于营养生长状态的顶芽、(b，B)显示生殖生长初期的顶芽、(c，C)显示顶花原基分化期、(d，D)显示花萼原基分化期；。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1：