[发明专利]丛枝菌根真菌孢子的表面消毒方法

权利要求书

1.丛枝菌根真菌孢子的表面消毒方法，其特征在于：是通过以下技术方法实现的：

1.a.取两张滤纸将其边缘上折后铺入其中一个培养皿内，裁剪一些吸水纸放入其它几个培养皿内，另留二个空培养皿不放滤纸与吸水纸，将培养皿包严，备用蒸馏水，对培养皿和蒸馏水进行高压蒸汽灭菌；

1.b.配制含有氯胺T、氯霉素、硫酸庆大霉素、硫酸链霉素和吐温-20共5种试剂的孢子表面消毒液，将消毒液通过微孔滤膜过滤除菌；

1.c.打开装有双层滤纸的培养皿，将载有AMF孢子的滤纸片放入培养皿内的双层滤纸中间，用胶头滴管吸取消毒液滴加在上层滤纸上，使整个双层滤纸浸透并在上层可见消毒液，将培养皿封盖；

1.d.消毒过程中如需更换消毒液，可通过转移双层滤纸至装有吸水纸的培养皿内吸取消毒液，再转至另一套空培养皿中重新添加消毒液；

1.e.在消毒完成后，将双层滤纸转移到装有吸水纸的培养皿中，用吸水纸吸取双层滤纸所吸附的消毒液；

1.f.转移双层滤纸至装有吸水纸的另一培养皿中，用胶头滴管在上层滤纸中添加无菌水，利用吸水纸吸取水分，重复操作3-5次；

1.g.取出上层滤纸并倒置放入另一培养皿中，解剖镜下分别检查并转移上层滤纸、下层滤纸和滤纸片上的AMF孢子，AMF孢子的表面消毒完成。

2.根据权利要求1所述的丛枝菌根真菌孢子的表面消毒方法，其特征在于：是通过以下技术方法实现的：

2.a.备用10套60mm的玻璃培养皿、直径为75mm的普通滤纸和吸水纸，取两张滤纸将其边缘上折后铺入培养皿底，其上折的边缘与培养皿壁留有空隙以便转移，裁剪一些吸水纸，大小刚好放入培养皿底，4张一组放入培养皿内，共放置7套培养皿，另留二套空培养皿以备转移双层滤纸，将培养皿包严，备用200ml蒸馏水和2支胶头滴管，对培养皿、蒸馏水和胶头滴管在121℃下高压蒸汽灭菌20min；

2.b.配制含有50g/L氯胺T、50mg/L氯霉素、100mg/L硫酸庆大霉素、200mg/L硫酸链霉素和0.05％吐温-20的孢子表面消毒液20mL，将消毒液通过0.22μm孔径的微孔滤膜过滤除菌；

2.c.整个孢子表面消毒过程在室温条件下，放置于超净工作台上进行，打开装有双层滤纸的培养皿，将载有孢子的滤纸片放入培养皿内的两层滤纸正中，用胶头滴管吸取消毒液从一侧开始滴加在双层滤纸的上层滤纸上，使整个双层滤纸浸透并在上层可见消毒液，封盖培养皿，消毒液滴加过程中避免产生气泡；

2.d.消毒过程中如需更换消毒液，可通过转移双层滤纸至装有吸水纸的培养皿内吸走消毒液，再转至另一套空培养皿中重新添加消毒液来实现；

2.e.消毒时间为15min，消毒完成后，将双层滤纸转移到装有吸水纸的培养皿中，用吸水纸吸取滤纸吸附的消毒液；

2.f.转移双层滤纸至装有吸水纸的另一培养皿中，用另一个胶头滴管在上层滤纸表面添加无菌水，利用吸水纸从下层滤纸吸收水分，重复操作5次；

2.g.取出上层滤纸并倒置放入另一套培养皿内，解剖镜下分别检查并转移上层滤纸、下层滤纸及滤纸片上的AMF孢子，AMF孢子的表面消毒完成。