[发明专利]一种脂肪基质细胞分化成心肌细胞的培养液及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是一种脂肪基质细胞分化成心肌细胞的培养液及其制备方法。

背景技术

脂肪基质细胞分化成心肌细胞的培养液，是一种诱导脂肪组织来源的基质细胞或成体干细胞在体外定向分化成具有自发收缩功能的心肌细胞的培养体系，由于成体干细胞用于医学临床组织修复日益受到重视，因此这一体系在科研和临床上的应用价值也日益显示出其重要性。培养液中的添加物、血清的种类和浓度，以及培养液的PH值等均决定着基质细胞或干细胞向功能性心肌细胞的分化程度。此外，添加物还不同程度地影响着基质细胞或干细胞定向分化这一过程的分子途径，极大地限制了脂肪基质细胞向心肌细胞分化的分子机理的研究。

目前国外仅见3-5个研究机构报道已在体外成功将脂肪基质细胞诱导为具有自发收缩功能的心肌细胞，他们所使用的培养体系略有不同，总体来看这些培养体系存在以下缺点：①依靠单一添加物，如：去甲基化试剂5-azacytidine或抗氧化剂2-Mercaptoethanol等辅助诱导分化；②使用带有复杂添加物的商业化培养液MethoCultGF M3534(其中的添加物包括：rh-Insulin，2-Mercaptoethanol，rm-Stem Cell Factor，rm-IL-3和rh-IL-6等)辅助诱导分化；③使用与心肌细胞共培养体系体外诱导分化。

虽然上述培养体系均能获得具有自发收缩功能的心肌细胞，但它们亦存在以下几个问题：①复杂的培养体系导致难以划分有效诱导成分，为进一步提炼体外诱导脂肪基质细胞分化成心肌细胞的关键成分带来困难；②复杂的添加物可能直接影响到生成的心肌细胞的基本生物学特性，进而影响到其临床应用；③体外与心肌细胞共培养的诱导体系在临床应用中困难；④添加物价格昂贵。

发明内容

本发明为解决上述问题，提供一种脂肪基质细胞分化成心肌细胞的培养液，解决以上几大问题，使脂肪基质细胞向心肌细胞分化的培养体系简单、明确，且达到较高的应用安全标准。

本发明技术方案如下：

一种脂肪基质细胞分化成心肌细胞的培养液的制备方法，

①、在120℃温度下将去离子水灭菌30分钟，自然冷却至室温；②、将Gibco DMEM高糖培养基、NaHCO₃、HEPES、Gibco胎牛血清、青霉素和链霉素倒入①的灭菌去离子水中，用磁力搅拌机搅拌均匀；③、将②依次经过0.45μm和0.22μm的无菌微孔滤膜过滤；④、4℃保存备用。

所述的培养液，使用HCl或NaOH在步骤②中调节培养液的PH值在7.2～7.4。

所述的培养液，Gibco胎牛血清体积百分比为15～25％。

一种脂肪基质细胞分化成心肌细胞的培养液，各成分含量如下：

Gibco DMEM高糖培养基：10g/L；

NaHCO₃：2.3g/L；

HEPES：2.6g/L；

Gibco胎牛血清：15～25％(体积百分比)；

青霉素：5×10⁴U/L；

链霉素：5×10⁴U/L；

去离子水：75～85％(体积百分比)。

获得一种简单、明确的脂肪基质细胞向心肌细胞分化的培养液体系，且达到较高的应用安全标准。

附图说明

图1为从脂肪基质细胞向心肌细胞分化的细胞的形态学变化图。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。

本发明实现上述目的的方案是：一种脂肪基质细胞分化成心肌细胞的培养液的制备方法，其特征是：各成分含量如下：Gibco DMEM高糖培养基：10g/L；NaHCO₃：2.3g/L；HEPES：2.6g/L；Gibco胎牛血清：15～25％(体积百分比)；青霉素：5×10⁴U/L；链霉素：5×10⁴U/L；去离子水：75～85％(体积百分比)。其制备方法为：①在120℃温度下将去离子水灭菌30分钟，自然冷却至室温；②将Gibco DMEM高糖培养基、NaHCO₃、HEPES、Gibco胎牛血清、青霉素和链霉素倒入①的灭菌去离子水中，用磁力搅拌机搅拌均匀；③将②依次经过0.45μm和0.22μm的无菌微孔滤膜过滤；④4℃温度保存备用；⑤使用前需先预热至37℃温度方可使用。

培养实验如下：