[发明专利]人黑色素瘤细胞相关的长非编码RNA的RNA干扰靶点RNA及用途

说明书

技术领域

本发明属于生物医学专业领域，涉及属于人源lncRNA的一种新型lncRNA、 其RNA干扰(RNA interference，RNAi)靶点序列和短发夹RNA(short-hairpin RNA， shRNA)序列、shRNA编码的小分子干扰RNA(small interference RNA，siRNA)、 编码shRNA的正义及反义链DNA、编码shRNA的真核重组质粒、以及在制备 诊断黑色素瘤疾病试剂及制备治疗黑色素瘤疾病药物中的用途。

背景技术

人体中编码蛋白质的基因大约有2-3万个，仅占人类基因组的2％，其余98％ 不编码蛋白质的基因组DNA最初被认为是没有功能的，是生物体中的垃圾，通 常被称为“垃圾DNA”(junk DNA)。但目前的研究表明，这些垃圾DNA大多可转 录产生非编码RNA(non-coding RNA，ncRNA)。根据成熟转录本大小的不同， ncRNA可分为小分子ncRNA(如siRNA、miRNA、piRNA等)，中等长度 ncRNA(70-200nt)和长ncRNA(long ncRNA，lncRNA，≥200nt)。目前，ncRNA领 域研究较多的是小分子ncRNA，而对lncRNA的研究还处于起步阶段。由于序 列内部存在过多的终止密码子，lncRNA不能被翻译成蛋白质，他们通常是以 RNA转录本的形式行使其生物学功能，如发育过程中的细胞分化、细胞增殖、 细胞凋亡和类固醇代谢等，越来越多的证据表明lncRNA在细胞中起着调控基因 表达的重要作用。最近的研究发现lncRNA与细胞的癌变有着极为密切的联系， 起肿瘤抑制基因作用的lncRNA表达下降或者缺失会导致肿瘤的发生，已经发现 lncRNA与肺癌、非霍杰金淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病等 肿瘤疾病有关。这些研究结果都表明lncRNA在细胞增殖、分化和癌变中发挥着 重要的作用，肿瘤相关lncRNA的发现可能会对肿瘤的诊断及基因治疗产生重大 的影响。通过大范围分析肿瘤和正常组织的lncRNA，可以鉴定与肿瘤特异相关 的lncRNA，使其成为潜在的病理诊断标记。通过引入针对具有癌基因特性的 lncRNA的shRNA可以有效地表达特异性的siRNA并抑制lncRNA作用的发挥， 比其他的治疗手段的毒副作用会更低。相反，通过病毒载体或质粒载体过表达具 有肿瘤抑制基因作用的lncRNA，进而抑制其调控的特定靶基因的表达，也可以 达到抑制肿瘤生长的效果。因此，发现肿瘤特异性表达的lncRNA对基于lncRNA 的肿瘤诊断和治疗具有十分重要的意义。

发明内容

恶性黑色素瘤是一种产生黑色素的高度恶性肿瘤。恶性黑色素瘤多发于欧美 白种人，发病率占全部恶性肿瘤的1％-3％，但呈明显上升趋势，针对恶性黑色 素瘤的诊断和治疗的生物分子的发现具有重要的应用价值。本发明的目的是提供 一种人黑色素瘤细胞相关相关的长非编码RNA(long non-coding RNA， lncRNA)-lncRNA-HN3、其RNA干扰(RNA interference，RNAi)靶点RNA和短 发夹RNA(short-hairpin RNA，shRNA)、shRNA编码的小分子干扰RNA(small  interference RNA，siRNA)、编码shRNA的正义及反义链DNA及转录shRNA的 重组质粒；本发明的再一目的是提供所述人黑色素瘤细胞相关的lncRNA及 shRNA、siRNA和转录shRNA的重组质粒的用途。