[发明专利]盐分量测定方法

说明书

本案是申请号为200980104263.4、发明名称为肌酸酐浓度和盐分量的测定方法、测定设备和测定装置的专利申请的分案申请

技术领域

本发明涉及用于进行在试样中包含的肌酸酐(creatinine)和盐分的定量的测定方法、测定设备和测定装置。

背景技术

包含在试样中的肌酸酐浓度的测定在临床化学和分析化学的领域中是重要的。肌酸酐是肌肉的内在代谢的产物，所以众所周知，尿中的肌酸酐量反应总肌肉质量。因此，人类在一天中排泄的尿中的肌酸酐量一般对每个人来说是一定的，不会按日变化。因此，存在使用尿中的肌酸酐量作为排泄的尿的浓淡的尺度的情况。另外，尿中和血中的肌酸酐量会因尿毒症或肾功能低下而增减。因此，通过尿中或者血中的肌酸酐量的测定，能够得知有无尿毒症或肾功能低下。

作为肌酸酐浓度的测定方法，已知有基于使用着碱性的苦味酸溶液的碱性苦味酸法(Jaffe反应)的方法。在该方法中，对苦味酸与肌酸酐反应而得到的橙红色的生成物进行分光学测定(例如参照专利文献1)。

另外，作为其它的肌酸酐浓度的测定方法，已知使用与肌酸酐进行特异反应的酶的方法。作为使用酶的方法，例如，存在使用肌酸酐脱亚氨酶分解肌酸酐的方法(例如，参照专利文献2)。在该方法中，根据pH或者电位的变化等测定从肌酸酐的分解而产生的氨量，得到肌酸酐浓度。

作为使用酶的其它的方法，存在通过下述式(1)～(3)的反应测定肌酸酐浓度的方法。

肌酸酐+水→肌酸(Creatine)  (1)

肌酸+水→肌氨酸(Sarcosine)+尿素  (2)

肌氨酸+水+氧→

甘氨酸(Glycine)+甲醛(Formaldehyde)+过氧化氢  (3)

作为催化式(1)～(3)的反应的酶，分别依次使用肌酸酐酰胺水解酶(creatinine amidohydrolase)(creatininase，肌酸酐酶)、肌酸脒基水解酶(Creatine amidinohydrolase)(creatinase，肌酸酶)、肌氨酸氧化酶(Sarcosine oxidase)或者肌氨酸脱氢酶(Sarcosine dehydrogenase)。这里，作为肌酸酐的定量方法，例如使用下述方法，即，与过氧化物酶(peroxidase)一起利用无色染料(leuco色素)或Trinder试剂，使得在式(3)中生成的过氧化氢显色，以分光学进行定量的方法(例如，参照专利文献3)。另外，作为其它的肌酸酐定量方法，使用在电极对在式(3)中生成的过氧化氢进行电化学氧化，根据流过的电流定量肌酸酐的方法(例如，参照专利文献4和5)。

另外，作为使用酶的其它方法，提出了在上述式(1)和(2)的反应的基础上，取代上述式(3)的反应，使用肌氨酸与电子传输体(介体，mediator)的反应对肌酸酐进行定量的方法(例如，参照专利文献6和专利文献7)。

在专利文献6中公开了一种肌酸酐生物传感器，其在基板上至少具备一对作用极和对极，使试剂溶液在电极上或者电极周边的基板上干燥，从而将试剂固定化。试剂溶液是通过使得肌酸酐酶(creatininase)、肌酸酶(creatinase)、肌氨酸氧化酶和铁氰化钾(potassium ferricyanide)(介体)溶解在pH7～8.5的缓冲溶液中而得到的。另外，公开了如果缓冲溶液的pH不足7或者pH超过8.5，则酶活性降低，所以并不优选。

专利文献7中公开了，与肌氨酸氧化酶一起使用由环糊精包容的介体，通过比色法或者电化学的检测方法对肌酸酐进行定量的情况。具体而言，作为由环糊精包容的介体的例子能够举出α-萘醌(α-Naphthoquinone)(1，4-萘醌，1，4-Naphthoquinone)。但是，在专利文献7中，还公开了在介体没有被环糊精包容的状态下，不适合使用着酶的肌酸酐的定量的情况。

另外，作为使用酶的其它方法，提出了在式(1)和(2)的反应的基础上，取代式(3)的反应，使用肌氨酸与四唑(tetrazolium)指示剂的反应，以分光学定量肌酸酐的方法(例如，参照专利文献8)。专利文献8中，作为肌酸酐定量用试剂组成物，使用由肌酸酐水解反应酶、肌酸脒基水解酶、肌氨酸脱氢酶、作为四唑指示剂的噻唑蓝和pH7.5的磷酸钾构成的混合试剂。