[发明专利]长期贮藏梨花粉种质的方法

说明书

一、技术领域

本发明是长期贮藏梨花粉种质的方法，属于植物发育生物学领域。

二、背景技术

梨(Pyrus)属于配子体型自交不亲和性果树，绝大多数品种自花授粉不结实，在生产上必须配置授粉树，或者进行人工授粉才能获得预期的产量和品质。但在生产上由于花期不遇或者天气原因，常常需要从外地采集、调用花粉，甚至需要用到前一年贮藏的花粉；在梨育种工作中，根据育种目标的不同，育种者也常常要从各地调用具特殊或优异性状的梨种质花粉以丰富遗传多样性；此外，由于梨是典型的配子体型自交不亲和性果树，梨花粉在自交不亲和性机理的研究中常常作为重要的研究试材，但梨花粉一年只能采一次，这必然涉及到在一年的研究周期中花粉的贮藏问题。不论从梨树栽培、育种还是科学研究方面来说，其工作基础是花粉须具有较高的活力，具有较高活力的花粉是上述工作取得成功的关键性前提条件。因此，怎样在贮藏、运输过程中延长花粉寿命，最大限度地维持花粉活力对梨树生产、种质保存、科研具有重要意义。相关研究报道，花粉的活力受温度和湿度的影响，但尚未形成能够较好维持梨花粉活力的有效贮藏方法。一般常温下贮藏的梨花粉活力迅速下降，失去应用价值。本发明通过比较研究不同贮藏方法对梨花粉萌发和花粉管生长的影响，形成包含三个关键技术步骤的梨花粉长期贮藏技术。该技术操作简单易行，节省空间，有效维持了长期贮藏后梨花粉的活力，在梨树生产、育种、种质保存、科学研究等方面具有重要的应用价值。

三、发明内容

技术要求

本发明的目的在于解决梨花粉在常规贮藏过程中花粉活力急速降低，以致不能满足生产、科研需要的问题。

技术方案

本发明要解决上述问题所采用的新技术方案如下：

1、花粉采集方法：采含苞待放的大蕾期花苞，带回室内，揉搓花朵，使花药与花丝分离，用细孔筛筛下花药。雨后采花或花瓣沾有露时，先晾干再揉搓花朵。花药在温度20～25℃、相对湿度70％～80％、无阳光直射的室内单层摊匀，经1～2天后即可散出花粉。爆出的花粉用石蜡纸分小包包好，每包5cm×5cm×0.5cm大小，埋入放有变色硅胶的干燥容器中，外用锡纸包扎整齐，以达到干燥遮光的目的；

2、液氮冻存花粉：根据所藏花粉量的多少来选择大小合适的液氮罐，将包扎好的花粉置于液氮罐内，淹没于液氮。为防止液氮挥发殆尽，贮藏期间内每隔两个月补充一次液氮；

3、花粉复苏：待需要使用花粉时，打开罐口，倾倒出罐内的液氮，此时切忌立即将包扎的花粉直接暴露于常温环境中。因为升温太快会导致花粉褐变，使得花粉蛋白酶性失活，大大降低花粉活力。应将贮藏的花粉依次在-73℃、-20℃、4℃中分别放置24小时进行逐步苏醒，最后于黑暗环境中恢复至室温，备用。

有益效果

本发明的贮藏方法有效地维持了经长期贮藏的梨花粉活力，对于梨树的生产、育种、种质保存、科学研究等方面具有重要的有益效果，具体表现如下：

(1)保障了人工授粉时采集、调运花粉过程中花粉的安全性，使生产中保存花粉以备来年使用，保障花粉充足供应成为可能；

(2)为育种工作中所需的不同地域来源花粉的高活力保存提供技术支撑，同时为通过花粉进行梨种质保存提供了一条新的途径；

(3)可以周年为梨自交不亲和性机理科学研究提供具高活力的梨花粉，克服了相关研究的季节局限性；

(4)本贮藏方法投资小，操作简单，能在很小的空间里贮藏大量的花粉，并可借鉴用于保存种子等其他种质资源，有着广泛的实用价值。

四、附图说明：

图1‘丰水’梨花粉在-20℃、-73℃、-196℃三种贮藏环境下花粉活力的变化；

图2长期贮藏梨花粉的流程示意图；

五、具体实施方式：

(一)实验方法

1、花粉采集：本专利以‘丰水’梨为研究试材，采集含苞待放的大蕾期花苞，收集花药，室温下干燥爆粉，待花粉散出后用石蜡纸包好，按不同的方法保存花粉，并定期进行检测；

2、花粉保存方法：

(1)花粉贮藏温度的梯度处理：将同一包花粉分成五份，每份约5cm×5cm×0.5cm大小，埋入放有变色硅胶(一种颗粒状干燥剂，蓝色，吸水后变白)的干燥容器中，分别在室温、4℃、-20℃、-73℃、-196℃条件下贮藏。其中室温下每隔5天，按上述花粉培养法测量一次花粉萌发率和花粉管长度。4℃每隔10天测量一次，而-20℃、-73℃、-196℃条件下贮藏的花粉将于贮藏之日起第30天、60天、90天、180天、270天、360天进行测定；