[发明专利]用于定量检测HER2扩增的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及用于诊断癌症的试剂盒。具体地说，本发明涉及通过定量检测HER2扩增来诊断癌症的试剂盒。

发明背景

我国每年新发乳腺癌约18万例。在近三成乳腺癌患者中，其肿瘤细胞表面的HER2蛋白含量增多，这种情况被称为“HER2阳性”。HER2又被称作人表皮生长因子受体2，在调控细胞的生长、发育和分化中发挥重要作用。一旦过度表达(即HER2阳性)，HER2便会刺激癌细胞疯狂增长，使其侵袭性增加。因此，HER2阳性乳腺癌的进展速度比其它类型乳腺癌更快，恶性程度更高，复发和转移更快[Burstein HJ，N Engl J Med，2005，353(16)：1652-1654]。研究结果表明，如果只接受常规综合治疗，HER2阳性乳腺癌患者的生存时间仅为HER2阴性患者的一半。

HER2阳性乳腺癌患者可从曲妥珠单抗(Herceptin)单药方案或与部分化疗药物联合方案中获益[Piccart-GebHERt MJ，Procter M，et al.NEngl J Med，2005，353(16)：1659-1672；Romond EH，Perez EA，et al.NEngl J Med，2005，353(16)：1673-1684]。单克隆抗体Herceptin与HER2受体细胞外区域结合，具有高度亲和力和特异性，既能阻断HER2受体而产生抗肿瘤效应，又能与人体免疫细胞作用，产生抗体依赖性细胞毒(ADCC)效应和补体介导细胞毒(CDC)效应。Herceptin单药对于HER2阳性的转移性乳腺癌的治疗总有效率为23％，对其中HER2(+++)患者的有效率达31％。目前临床上Herceptin主要用于治疗HER2基因扩增或过度表达且伴腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者[Pegram MD，Konecny GE，et al.J Natl Cancer Inst，2004，96(10)：739-749]。由此可见，如果能够及早确定HER2的扩增或表达状态，便可及早使患者接受更佳的治疗方案，让患者拥有更多的生存机会。

在《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范(2007版)》、《乳腺癌HER2检测指南》(2009版)、《乳腺癌临床实践指南(中国版)》(2009年第一版)中均指出：对于HER2免疫组化结果不明确的患者，需要应用FISH检测来确定。然而，FISH检测价格较为昂贵，导致不少乳腺癌患者丧失了检测机会。有研究表明，实时荧光PCR法与FISH方法检测乳腺癌组织样本的一致性高，且可能具有更高的灵敏度[Gjerdrum LM，Sorensen BS，et al.J Mol Diagn，2004，6(1)：42-51]。

本试验所用人HER2基因扩增定量检测试剂盒(实时荧光PCR法)相对于FISH检测具有以下优点：

1.样本处理过程简便，实验周期短，实验操作易于标准化。

2.价格适中，易于临床推广。

3.定量准确，这是本试剂方法最独特的优点。通过实时荧光PCR扩增曲线参数，定量测定样本中HER2基因拷贝数。

4.减少人为实验误差。FISH检测易因主观因素造成结果误判，同时也受到检测者专业知识和实验室条件的限制，且目前FISH检测试剂价格较高，很难大面积推广。

人HER2基因扩增定量检测试剂盒(实时荧光PCR法)是第一个实现HER2基因扩增检测批量化、标准化的产品。

发明内容

本发明要解决的问题是提供一种HER2基因扩增的定量检测试剂盒。

为解决上述问题，本发明提供包含Taq酶、10×Taq缓冲液、MgCl₂、dNTP混合液及可特异性扩增HER2基因的PCR引物与探针的定量检测试剂盒及检测方法：

(1)针对HER2基因组DNA设计上下游引物及特异性的探针，该引物可以特异性的扩增HER2基因组的一段序列，该探针可与HER2特异性结合。

(2)为定量检测HER2扩增比例，本发明设计了内参，针对内参基因ACTB基因组DNA设计上下游引物及特异性的探针，该引物可以特异性的扩增ACTB基因组的一段序列，该探针可与ACTB特异性结合。