[发明专利]油棕花粉超低温保存法

说明书

技术领域

本发明涉及一种花粉保存方法，具体是一种油棕花粉超低温保存法。 

背景技术

油棕属多年生单子叶植物，是热带木本油料作物，其果肉、果仁含油丰富，有“世界油王”之称，棕油主要用来制造肥皂、润滑油、化妆品等，也是纺织业、制革业、铁皮镀锡的辅助剂等，棕油精炼后是营养价值极高的食用油脂，可制造人造奶油，具有较高的经济价值。油棕是异花授粉植物，雌雄花序交替开放，通常靠风媒和虫媒授粉。授粉是影响油棕产量的重要因素之一，主要表现在：(1)授粉不足导致产量降低，特别是在幼龄油棕园；(2)油棕园雄花数量以及雌雄花比例也影响油棕的授粉结实，特别是在雨季，风媒和虫媒授粉能力降低，导致产量下降；(3)油棕园中其他昆虫如蜜蜂等的采集，导致花粉量大幅度减少，授粉不足。因此，人工控制授粉是必要的，而采用保存的花粉用于人工控制授粉是克服油棕授粉不足的主要措施之一，因为保存的花粉用于人工授粉不但可以保持产量而且在油棕杂交育种工作中也是很重要的。 

花粉的长期保存技术不但是保存单倍体植物资源的有效方法，而且能够克服在育种工作中存在的时空障碍。目前油棕花粉的长期保存 方法主要有以下两种： 

(一)是把真空干燥后的花粉(剩余含水量为3-4％)在低温下贮存(-10℃、-15℃和-20℃)，贮存时间不超过1年。其主要缺点是贮存时间短；保存后的花粉萌发力低，结实率差，正常胚的百分比低；干燥花粉在制备时其剩余含水量很难达到3-4％，且制备程序繁琐； 

(二)是把干燥的花粉(剩余含水量为23.3％)装入冷冻管中直接贮存在液氮中，然后再将冷冻管放至冷冻库中(汽化液氮，-170℃～-180℃)，贮存时间可达8年。其主要缺点是花粉保存的成本太高。 

发明内容

本发明的目的是提供一种油棕花粉超低温保存法，利用超低温条件下所有植物组织的代谢活动停止的特性，在超低温下对油棕花粉进行保存，有效地使花粉的活性保持下来，具有工艺简单、成本低、花粉萌发率高等特点。 

超低温保存已经成为一种花粉长期保存的有效方法，其关键在于降温过程中避免花粉细胞内结冰，化冻过程中防止细胞内再次结冰。因此，花粉的剩余含水量是决定油棕花粉超低温保存成败的关键。 

本发明所采用的技术方案： 

一种油棕花粉超低温保存法，是将采集的新鲜油棕花粉用80～100目筛子过筛，以去除其中杂质，然后用电热恒温鼓风干烘箱在37～40℃条件下连续干燥12小时以上，使油棕花粉的剩余含水量为8～9％；将干燥后的油棕花粉装入冷冻管中直接投入到液氮(-170～-196℃)中预冻处理1～2小时，然后再移入到-70℃以下的超低温冰 箱中保存，化冻时将超低温保存的油棕花粉用常温自来水冲洗0.5～1分钟即可化冻。 

为了保持油棕花粉的新鲜度，新鲜花粉在短途运输(24小时以内)过程中采用塑料封口袋携带，在长途运输(120小时以内)过程中采用冰盒(冰盒内装冰块，冷冻管装入花粉后放入冰盒中)携带。 

本发明工艺简单，成本低，在控制花粉剩余含水量的前提下于超低温下对油棕花粉进行保存，有效地实现油棕花粉的长期保存，具有保存成本低、贮存时间长、花粉萌发率高等优点。 

具体实施方式

以下对本发明的操作过程做进一步描述，并介绍本发明的相关研究结果。 

1、操作过程：于晴天上午9-11时采集新鲜花粉，根据运输距离或时间长短，采用冰盒或塑料封口袋装入花粉并带回试验室，新鲜花粉用80-100目筛子过筛去杂后，用量勺量取过筛后的花粉倒入上述规格的筛子中，将花粉均匀地抖落在硫酸纸或垫有硫酸纸的培养皿上，然后放入37-40℃的恒温干燥箱中干燥12小时以上，使花粉剩余含水量为8-9％，将上述烘干干燥花粉(约0.5克)装入2ml内螺纹冷冻管中，扭紧管盖后直接投入到液氮中(-196℃)预冻处理1-2小时，然后将装有花粉的冷冻管移入超低温冰箱(-70℃以下)中保存，保存3、6、12个月后，从超低温冰箱中取出并立即用常温自来水冲洗化冻0.5-1分钟。将化冻后的油棕花粉与滑石粉按1∶10的比例混匀后直接用于油棕树的授粉，油棕果实成熟后采果观测其果实性 状和产量水平。 

2、结果分析 

1)、不同携带方式与花粉萌发率关系 

对需要长途或长时间进行花粉运输的，可采用冰盒进行携带，携带时间不宜超过120小时；对短途或长时间运输的，可采用塑料封口袋携带，并在24小时内带回试验室进行保存。所得结果列表如表1。 

表1不同携带方式与花粉萌发率关系