[发明专利]促甲状腺激素定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及体外免疫检测技术，尤其是涉及一种将酶促化学发光技术与磁分离技术相结合的促甲状腺激素定量检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

促甲状腺激素(thyrotropin，thyroid stimulating hormone，TSH)是腺垂体分泌的促进甲状腺生长和机能的激素。人类的TSH为一种糖蛋白，是由垂体前叶分泌的一种糖蛋白激素，含211个氨基酸，糖类约占整个分子的15％，整个分子由两条肽链——α链和β链组成，分子量为28000D。TSH分子α亚基的氨基酸序列与其他的糖蛋白激素如促黄体素(LH)、促卵泡素(FSH)和人绒毛膜促性腺素(HCG)的α亚基基本相同。β亚基为TSH所特有的，决定TSH的特异性。血清中除有生物活性的整分子TSH外，还有无生物活性的α及β亚基。TSH全面促进甲状腺的机能，稍早出现的是促进甲状腺激素的释放，稍晚出的为促进T4、T3的合成，包括加强碘泵活性，增强过氧化物酶活性，促进甲状腺球蛋白合成及酪氨酸碘化等各个环节。TSH促进甲状腺上皮细胞的代谢及胞内核酸和蛋白质合成，使细胞呈高柱状增生，从而使腺体增大。腺垂体分泌TSH，一方面受下丘脑分泌的促甲状腺激素释放激素(TRH)的促进性影响，另方面又受到T3、T4反馈性的抑制性影响，二者互相拮抗，它们组成下丘脑-腺垂体-甲状腺轴。正常情况下，下丘脑分泌的TRH量，决定腺垂体甲状腺轴反馈调节的水平。TRH分泌多，则血中T3、T4水平的调定点高，当血中T3、T4超过此调定水平时，则反馈性抑制腺垂体分泌TSH，并降低腺垂体对TRH的敏感性，从而使血中T3，T4水平保持相对恒定。骤冷等外界刺激经中枢神经系统促进下丘脑释放TRH，再经腺垂体甲状腺轴，提高血中T3、T4水平。

血清中TSH从各方面控制甲状腺的功能：从吸碘作用，甲状腺球蛋白的合成和分泌，直至甲状腺素的释放等。因此，整分子TSH的准确测定，是判断甲状腺和下丘脑-垂体-甲状腺轴的功能是否正常的首选指标。

从检测技术上来讲，过去以放免为代表的第一代TSH诊断试剂盒，因其最低检测限接近正常值下限，临床价值受到很大限制，已基本上退出市场，目前应用较多的为酶联免疫技术和化学发光技术。化学发光技术兴起于上个世纪80年代，是继酶联免疫技术和放免技术之后发展起来的新兴技术，由于其较高的灵敏度和特异性，同时方法也简便、快速，标记结合物稳定，无放射性同位素损伤和污染等特点，在近些年得到了飞速发展。免疫磁微粒技术是近几年新兴技术，它是利用高分子合成一定粒度大小的磁性固相微粒做载体，载体表面修饰有一定数量的化学功能团，可通过化学偶联等方法包被上具有特异性亲和力的免疫活性物质(抗原或抗体)，具有分离速度快、效率高、可重复性好、反应均相等诸多优点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种促甲状腺激素定量检测试剂盒，该试剂盒将酶促化学发光技术与磁分离技术相结合，成本低廉、简便快速且结果准确；本发明还提供该试剂盒的制备方法。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的促甲状腺激素定量检测试剂盒，它包括包被有抗促甲状腺激素单克隆抗体的磁微粒混悬液、促甲状腺激素系列校准品、辣根过氧化物酶标记的抗促甲状腺激素单克隆抗体、发光底物A液、发光底物B液及浓缩洗液。

所述磁微粒混悬液中的磁微粒粒径为0.8-1.5um，表面含有浓度为20-30ueq/g的羧基活性基团。采用活化剂对其羧基进行活化，然后与抗促甲状腺激素单克隆抗体上的氨基进行连接；

所述促甲状腺激素系列校准品是采用PH为7.4的Tris-NaCl缓冲液(三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液)基质，加入促甲状腺激素纯品、牛血清白蛋白及稳定剂配制而成。

所述辣根过氧化物酶标记的抗促甲状腺激素单克隆抗体采用的标记方法为碳二亚胺法。

所述发光底物A液由0.2M Tris-Hcl(三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液)、0.15mM Luminol(鲁米诺)、0.59mM羟基香豆素、0.35mM没食子酸组成；发光底物B液由0.85mM氨基酸氧化酶、0.8％tween 20(表面活性剂)、0.5mM DTPA(二乙烯三胺五乙酸)、0.12mM维生素C组成。

所述浓缩洗液为含有稳定剂和表面活性剂的磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液)。

本发明所述的促甲状腺激素定量检测试剂盒的制备方法，它包括下述步骤：

第一步，包被有抗促甲状腺激素单克隆抗体的磁微粒混悬液的制备