[发明专利]一种检测对位红的间接竞争法酶联免疫试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于酶联免疫和食品安全领域中违禁添加剂检测分析技术领域，具体而言，本发明涉及一种用于检测对位红的间接竞争法酶联免疫检测试剂盒。

技术背景

对位红属于偶氮系列化工合成染色剂，主要应用于油彩颜料及橡胶制品的着色，常温下呈固态。由于其结构(见下图)与致癌物苏丹红相似，在代谢过程中偶氮苯可被降解，产生苯胺，苯胺可直接作用于肝细胞，引起中毒性肝病，长期摄入苯胺可造成人体的神经系统损害，并具有潜在的致癌性，因此被禁止用于食品生产。

由于添加对位红后可使辣椒制品、番茄制品以及香肠等食品长期保持鲜艳光亮的樱桃红色，增加了产品的外观新鲜度，而且在偶氮染料中价格相对便宜，可大幅降低生产成本，因而被不法商家作为食品添加剂使用，以吸引消费者，虽屡禁而不止，给消费者带来巨大的危害。

(二)相关国家标准的检测方法现状

目前国内仍没有针对对位红的检测方法标准，其日常检测主要参考苏丹红的方法标准(GB/T 19681-2005)，采用溶剂萃取，液相色谱测定。国外实验室对位红的检测，则常采用液相、气相色谱法或与质谱联用进行定性、定量。这些方法具有检测精度高、灵敏、准确、稳定等一系列优点，但设备及检测费用昂贵、操作复杂、分析时间长，不能实现现场检测，限制了其推广和应用，也给对位红的快速检测和监管带来困难。目前国内外还没有专门针对对位红的快速免疫检测方法报道，因而建立高灵敏度的对位红快速检测技术成为当务之急。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速检测对位红的酶联免疫试剂盒。

本发明提供了一种快速检测对位红的酶联免疫试剂盒，该试剂盒包括：对位红特异性抗体、对位红-载体蛋白偶联物和酶标二抗。其中对位红特异性抗体为对位红的多克隆抗体或单克隆抗体，可用对位红与载体蛋白偶联物作为免疫原通过免疫动物(例如兔或鼠)制得。所述的载体蛋白为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白或匙孔铜兰蛋白(KLH)。所述的对位红-载体蛋白偶联物采用化学方法偶联得到。所述酶标二抗的标记酶为辣根过氧化物酶，所述酶标二抗可以用商品化的辣根过氧化物酶酶标二抗，也可以通过过碘酸钠法或戊二醛法将辣根过氧化物酶与二抗偶联制得。在本发明的一个优选实施方案中，所述酶标二抗为酶标羊抗兔IgG抗体或酶标羊抗鼠抗体。

用于制备所述酶标板的固相材料，包括但不限于，例如，聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯。载体的形式是微量反应板凹孔。

为方便现场检测和大量样本筛查，所述试剂盒还可以进一步包括包被有对位红抗原的酶标板、对位红标准溶液、显色剂、浓缩洗涤液、终止液和浓缩样品稀释液。

所述的浓缩洗涤液为0.5％吐温-20 10倍磷酸盐缓冲液。所述的显色剂由显色剂A液和显色剂B液组成(例如，使用体积比为1∶1)，显色剂A液为过氧化氢或过氧化脲，显色剂B液为四甲基联苯胺或邻苯二胺。所述的浓缩样品稀释液为含0.1％吐温-20的10倍磷酸盐缓冲液。

另一方面，本发明还提供了一种检测饲料、水产品或食品样品中对位红含量的方法，包括步骤：

(1)样品前处理；

(2)用权利要求1-9任一所述的试剂盒进行检测，向包被有对位红抗原的酶标板孔中加入标准品或样品溶液，再加入抗对位红多克隆或单克隆抗体，孵育后洗涤拍干，加入酶标记二抗，孵育后洗涤拍干，显色、终止，用酶标仪测定吸光度值；

(3)分析检测结果。

本发明试剂盒的检测原理为：

将对位红抗原吸附于固相载体上，加入样本或对位红标准品溶液并加入对位红抗体工作液，待测样品中对位红和固相载体上包被的对位红抗原竞争对位红抗体，再加入酶标记抗抗体进行酶活性的放大作用，显色后终止，测定样品的吸光度值，该值与样品中对位红的量呈负相关，与标准曲线比较即可得出对位红浓度范围。

有益效果：

本发明检测对位红的试剂盒主要采用间接竞争酶联免疫吸附测定法定性或定量测定样品中对位红红含量；对样品的前处理要求低，样品前处理过程简单，能同时快速检测大批样品。

本发明中，该试剂盒采用高特异性的对位红多克隆或单克隆抗体，主要试剂以工作液形式提供，可以减少试剂盒的操作步骤，为使用者节省时间并降低因操作步骤冗繁造成的误差，本发明具有灵敏度高、特异性强、高精确度、高准确度、对仪器设备要求低、试剂保存时间长、自动化程度高、无放射性同位素污染的等优点，可在饲料及动物源性产品检测中发挥重要作用。

附图说明