[发明专利]一种多发性骨髓瘤特异性蛋白及其专用检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种多发性骨髓瘤特异性糖基化蛋白质及其专用检测试剂盒。

背景技术

多发性骨髓瘤是血液系统常见的一种恶性肿瘤，表现为单克隆的浆细胞恶性增生。其发病率居血液恶性肿瘤发病率的第2位。多发性骨髓瘤起病缓慢、隐匿，早期临床表现不明显，容易被误诊。就诊时大部分已经是中晚期。因此需要研究有效、简单的早期诊断标志物及其诊断方法，以实现多发性骨髓瘤的早期发现(Oncologist，2007，12：664；Journal of Clinical Oncology，2005，23：6345)。

人血清/血浆中白蛋白是单链球形蛋白质，也是血清/血浆中含量最高的蛋白质，通常情况下是非糖基化蛋白。其具有独特的结构和许多重要的生理功能。包括：营养价值；维持血液胶体渗透压；清除自由基；还可以结合和运输许多内源性与外源性物质，如：血清Ca²⁺、未结合胆红素、游离脂肪酸以及甲状腺激素等。人血清/血浆白蛋白本身还是许多内源性物质和外源性药物的载体，药物和白蛋白结合后，可以降低其生物利用度同时增加在体内的半衰期(Clin Perinatol，2004，31：475；Journal of Infusion Nursing，2006，29：260)。白蛋白可以通过改变其氧化状态如糖基化、二硫键的增加来影响其蛋白构象，进而影响和药物的结合效率(British Journal of Pharmacology，2007，151：580)。在多发性骨髓瘤的临床检查和诊断中，糖基化白蛋白水平同疾病进展有很大关系，是一个重要的预后指标。

人血清/血浆白蛋白三维结构包括三个结构上相似的功能域：I(1-195)、II(196-383)和III(384-585)，每个结构域又分为两个相似的螺旋结构的亚结构域。亚结构域IA-IB、IIA-IIB、IIIA-IIIB间的连接，则分别是¹⁰⁶K至¹¹⁹E、²⁹²E至³¹⁵V、⁴⁹²E至⁵¹¹A的三段伸展肽链，每个结构域具有不同的结合特性。目前公认在IIA和IIIA存在两个芳香族或杂环类物质的结合位点，在IB和IIIB存在长链脂肪酸的结合位点(Journal of Biological Chemistry，1999，274：29303；Protein Engineering，1999，12：439)。绝大部分药物都与白蛋白的亚结构域IIA结合，在此亚结构区域中存在一个可以与许多药物结合的较大的疏水区，其它亚域也可能对其结合产生影响。

发明内容

本发明的目的是提供一种多发性骨髓瘤特异性糖基化蛋白质及其专用检测试剂盒。

本发明所提供的多发性骨髓瘤特异性糖基化蛋白质，其氨基酸序列为序列表中序列1，所述序列1的氨基端第342位氨基酸残基为糖基化位点，该位点连接的糖链组成为[Hex]₅[HexNAc]₅[Fuc][NeuNAc]。

上述多发性骨髓瘤特异性糖基化蛋白质糖基化位点为³⁴²N(N为天冬酰胺)，属于N-连接的复杂型糖链，糖链组成为[Hex]₅[HexNAc]₅[Fuc][NeuNAc]。其中，Hex表示己糖，HexNAc表示N-乙酰氨基己糖，Fuc表示岩藻糖，NeuNAc表示唾液酸。³⁴²N糖基化位点位于IIB，与健康人血清白蛋白的差异为自氨基端第344位丙氨酸(³⁴⁴A)突变为苏氨酸(³⁴⁴T)，该位点的突变所引起的糖基化可能与多发性骨髓瘤的发生有关。

本发明所提供的检测多发性骨髓瘤特异性糖基化蛋白质的试剂盒，包括刀豆凝集素亲和层析试剂盒、SDS-PAGE电泳试剂盒、胰蛋白酶、蛋白酶K、糖肽富集分离试剂盒和质谱仪。

所述糖肽富集分离试剂盒包括以质量比为1∶1的石墨碳和活性炭的混合物为填料的层析柱。所述石墨碳的颗粒直径范围为5-8μm，活性炭颗粒直径范围为3-5μm。

所述刀豆凝集素亲和层析试剂盒包括刀豆凝集素亲和层析柱、结合缓冲液和洗脱缓冲液；所述结合缓冲液为由20mM Tris-HCl，0.15M NaCl，1mM MnCl₂，1mM CaCl₂和水组成，pH7.4的溶液；所述洗脱缓冲液为pH7.4，0.5M甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷的水溶液。