[发明专利]一种油菜叶片亮氨酸含量快速检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及油菜检测领域，尤其涉及一种油菜叶片亮氨酸含量快速检测方法。

背景技术

油菜是我国主要的油料作物和蜜源作物之一，油菜的种植面积占全国油料作物总面积的40％以上，产量占全国食用植物油总产量的60％以上，居世界首位。油菜不同时期的生长状况关系到油菜籽的产量和质量。油菜叶片中的氨基酸含量是油菜生长过程中一项非常重要的生理指标，对油菜叶片生理和有机物积累等生理过程有重要意义。因此可以通过检测油菜叶片中的氨基酸含量，得到油菜的生长状况。近年来，由于农村劳动力的减少，油菜种植中使用了大量的除草剂。有些除草剂是一种生长抑制剂，例如丙酯草醚，可以阻止直链氨基酸的生物合成，具有对油菜安全、杀草谱较广、除草活性高、持效期长，且低毒、低残留，与环境相容等特点。对油菜叶片中亮氨酸含量的检测，可以反映出某些除草剂对油菜生理和有机物积累的影响，对实现油菜生长状况的大田检测和连续监测，提高油菜籽的产量和质量有重要意义。

传统的油菜叶片亮氨酸含量检测方法是根据GB/T5009.124-2003，采用万分之一天平准确称取粉样0.05g置于10ml体积的安培瓶中，加入5ml6M HCL，用循环真空泵抽真空并在酒精喷灯上封口后置于110℃烘箱中消解24h；将冷却后的消解液完全转移到50ml容量瓶中定容、摇匀；吸取5ml上清液置于圆底磨口锥形瓶中，在旋转蒸发仪上(60～70℃)抽真空15min左右蒸干盐酸；重新加入0.02M HCl(pH 2.2)10ml，超声波充分溶解后用一次性针筒吸出，经0.22μm的一次性滤头过滤至氨基酸分析专用样品瓶中，4℃黑暗保存，用日立L-8900自动氨基酸分析仪(日本)分析测定亮氨酸含量。该方法样本预处理过程和测量过程费时、费力、化学消耗品昂贵，且对环境造成了一定污染。因此，急需研究一种简单、快速、无损的油菜叶片亮氨酸含量检测方法和技术。

可见/近红外光谱可以反映物质内部的有机成分，特别是C-H、O-H、N-H等基团的倍频和合频吸收，可用于定量测定物质有机物质的含量。光谱技术已广泛应用于农业、食品、石油化工、制药、饲料等行业。在植物生命信息快速检测研究中具有广泛的应用潜力。

发明内容

本发明提供了一种油菜叶片亮氨酸含量快速检测方法，解决了现有检测方法费时、费力、操作复杂、成本高、污染环境等问题。

一种油菜叶片亮氨酸含量快速检测方法，包括以下步骤：

(1)将油菜叶片杀青、烘干后粉碎，得到叶片粉末；

(2)分别采集波长2360nm、2386nm、2306nm、2314nm、2330nm、1194nm、2198nm、1420nm、1462nm、2106nm、1602nm、1878nm、2426nm、1814nm、2274nm、1676nm、1910nm和2052nm光波所对应的油菜叶片的反射率；

(3)将各反射率分别代入多元线性回归方程：y＝199.490λ₁-205.134λ₂-157.082λ₃+158.636λ₄-98.514λ₅-40.158λ₆+74.919λ₇+79.434λ₈-79.398λ₉-76.208λ₁₀+142.368λ₁₁+45.322λ₁₂+47.134λ₁₃-45.866λ₁₄+27.124λ₁₅-99.757λ₁₆-19.316λ₁₇+44.704λ₁₈+2.5554，计算油菜叶片中亮氨酸含量；

方程中y为油菜叶片亮氨酸含量，单位为mg/100mg DW，λ₁～λ₁₈分别为波长2360nm、2386nm、2306nm、2314nm、2330nm、1194nm、2198nm、1420nm、1462nm、2106nm、1602nm、1878nm、2426nm、1814nm、2274nm、1676nm、1910nm和2052nm光波所对应的油菜叶片粉末样本的反射率。