[发明专利]一种采用MIT技术与SPR技术相结合检测克伦特罗的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种采用MIT技术与SPR技术相结合检测克伦特罗的方法，属于克伦特罗检测领域。

背景技术

克伦特罗(Clenbuterol，CL)又称克喘素，是一种β-肾上腺素激动剂(简称β-兴奋剂)，医学上常用于治疗哮喘。具有促进动物生长、降低脂肪含量、提高瘦肉率的作用，因而常被用于饲料添加剂，俗称瘦肉精。它会在动物组织中形成残留，人食用了含有克伦特罗的猪肉后会引起中毒，通常会出现肌肉震颤、心悸、精神紧张、恶心、头晕等症状。我国政府于1997年明令禁止盐酸克伦特罗作饲料添加剂。但近年来因食用市售猪、禽肉和内脏而导致盐酸克伦特罗中毒的事件时有发生，因此CL的快速、现场、定量检测有着非常重要的意义。

目前对克伦特罗进行检测的手段或方法较多，但这些方法都需要对样品进行预处理，需要用大量的有机溶剂，存在严重的基体干扰且需要专门技术人员和大规模昂贵仪器，不适合现场快速检测的需要，而且有些方法还存在重现性不好或样品制备周期过长等问题。在此背景下，国内外法庭科学工作者积极开发新的检测技术和样品预处理方法，分子印迹技术从此得到应用。采用分子印迹技术制备的分子印迹聚合物具有亲和性和选择性高、抗恶劣环境能力强、稳定性好、使用寿命长、应用范围广、成本便宜等特点，近年来在药品检测中的应用逐渐展开，并显示出广阔的前景。

分子印迹技术(Molecular Imprinting Technology，MIT)是模拟自然界所存在的分子识别作用，如酶与底物、抗体与抗原等，制备对某一特定目标分子具有特异选择性的聚合物，即分子印迹聚合物(Molecularly Imprinted Polymers，MIPs)的过程。它是通过以下方法来实现的：以特定目标分子为模板，将具有结构互补的功能单体通过共价键或非共价键与模板分子相结合，在一定的溶液中利用交联剂使功能单体聚合，从而在模板分子周围形成高度交联的具有一定刚性的高分子聚合物。反应完成后设法将模板分子从聚合物中去除，聚合物的内部就形成了与模板分子在空间位置和结合位点完全匹配的结构。印迹分子去除后留下的孔穴与印迹分子在空间结构、大小、电荷等方面都具有非常好的互补性，因而这种聚合物具有特异性识别印迹分子的功能。该技术是近年来发展起来的一种合成对某一特定分子(印迹分子)具有选择性的聚合物的方法，已成为高分子聚合物中储藏分子信息的有效手段，可以使聚合物在分子水平(层次)上对特定物质进行识别。分子印迹聚合物膜正是研制传感器关键器件的最佳选择。分子印迹聚合物膜具有操作简便，耗能少，反应时间短，干净无污染，识别性能高，稳定性好等特点。同生物膜相比，又具有耐恶劣环境、稳定性高、易于处理和应用的优点。

目前，测定克伦特罗的方法主要有高效液相色谱法(HPLC)，高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)和免疫分析法等。但这些技术操作繁琐而且费用高，不易用于样品筛选的快速检测。免疫学分析方法特别是ELISA法，具有选择性好、灵敏性高和操作方便等优点，是目前克伦特罗残留快速检测的主要方法。但是，以ELISA法制作的检测克伦特罗试剂盒价格比较昂贵，贮藏条件苛刻，假阳性比较高，限制了它的进一步使用^[1]。这就要求有更新颖的快速检测技术出现。表面等离子体共振传感技术(SPR)是一种在线、快捷、定量及无需标定的分析技术，它的前处理简单，已成为药品检测中的前沿性技术。